Саров олимп: Спортивный центр «Олимп» в Сарове

Шиномонтаж Олимп Саров: отзывы, контакты, ассортимент услуг

Мы собрали самую полную информацию о шиномонтаже Олимп: отзывы, контактный телефон, сайт, перечень услуг, режим работы.

Название:	Олимп
Адрес:	Нижегородская обл., Саров г., Варламовская дорога 5А
Режим работы:	пн-пт 7:00–20:00; сб,вс 9:00–19:00
Услуги:	запчасти для автомобилей; химчистка салона; марка автомобиля; кузовной ремонт; хранение шин; оплата картой; стоимость мойки кузова; грузовой шиномонтаж; шиномонтаж; выездной шиномонтаж; развал-схождение; мойка; базовое сервисное обслуживание;
Телефон:	+7 (83130) 2-22-20 +7 (910) 131-22-20
Сайт:

Шиномонтаж Олимп располагается в шаговой доступности от спальных районов и крупных транспортных развязок в городе Саров. Уточнить стоимость услуг и наличие очереди вы можете по телефону шиномонтажа.

Шиномонтаж Олимп на карте

Ниже представлен шиномонтаж Олимп на карте города Саров.

Отзывы об шиномонтаже Олимп Саров

Часто автолюбители сталкиваются с недобросовестной работой на шиномонтаже. Если вы пострадали от действий сотрудников на данном шиномонтаже, обязательно оставьте свой отзыв. Этим вы поможете многим пользователям. Помните, что некачественно выполненные услуги шиномонтажа влияют не только на ваш автомобиль, но и на вашу жизнь

Подбор туров 🔥 из Саров в отель Олимп 3* Россия Анапа

Поиск туров из Саров в отель Олимп 3* Россия в Анапа в 2020 году по лучшим ценам через официальный сайт туроператора!

Добро пожаловать в город-курорт Анапа, самый солнечный город на Черноморском побережье! Именно здесь и расположился небольшой, но такой гостеприимный и недорогой курортный отель на берегу моря «Олимп». Курортный отель «Олимп» открыл свои двери в 2013 году, и с тех пор радует своих гостей высоким сервисом обслуживания, уютной атмосферой, отличным питанием, бассейнами и умеренными ценами.

Южное черноморское гостеприимство придётся здесь по душе каждому, кто желает чувствовать себя как дома. Удачное расположение в центре Пионерского проспекта делает отель отличным выбором как для семейного отдыха с детьми, так и для молодых пар. «Олимп» имеет и массу других преимуществ: бар и ресторан, собственный оборудованный пляж, детский и взрослый бассейны, тренажеры на улице, детская площадка, аэрохоккей, настольный теннис, мини-бильярд.

Мы предлагаем размещение в просторных комфортабельных номерах от 2 до 4 человек. Ежедневная развлекательная анимационная программа при отеле порадует как взрослых, так и детей. Для полноценного и здорового отдыха в «Олимпе» организовано качественное питание, занятия по йоге и аквааэробике. А пока вы будете баловать себя райскими минутами уединения, о ваших детях позаботится заботливый воспитатель в игровой комнате.

Заказать номер в отеле Олимп 3* в Россия с лучшими отзывами недорого в Сарове на официальном сайте!

Туры в Олимп 3* в Сарове через сайт 2021

Подбор туров из Саров в отель Олимп 3* 🔥 Россия Анапа с перелетом в 2021 году через официальный сайт. Хотите провести незабываемы отдых? Оставьте заявку на нашем официальном сайте прямо сейчас и проведите незабываемый отпуск всей семьёй или вдвоем! У нас Вы можете недорого купить путевку в режиме онлайн, прямо из дома или офиса. Проведите свой отпуск в 2021 на все 100%! Оформите тур по лучшей цене на двоих или всей семьи и насладитесь незабываемым отдыхом. Если у Вас возникли вопросы, то оставьте заявку и наши менеджеры по туризму с радостью ответят на них. Если же данный отель занят, то рекомендуем Вам посмотреть другие гостиницы в Россия и конкретно в Анапа. Мы уверены, что на нашем официальном сайте каждый сможет найти предложение, которое удовлетворяет всем его потребностям.

Мы позаботимся о вашем отпуске, просто оставьте заявку на подбор прямо сейчас. Россия — это прекрасная страна, чтобы провести отдух вдвоем или всей семьёй в 2021 году. Наши менеджеры с удовольствием расскажут все её преимущества. Не откладывайте вопрос и путешествии в долгий ящик, а решите его прямо сейчас не выходя из дома или офиса. Купить тур в гостиницу Олимп 3* в Сарове на официальном сайте с перелетом по лучшей цене. Порадуйте себя и своих близких незабываемым приключением. Мы подберём для Вас самый лучший номер в рамках установленного бюджета и на нужные даты.

Главная | Межрегиональная олимпиада школьников «Будущие исследователи

Олимпиада «Будущие исследователи — будущее науки» входит в Перечень олимпиад школьников, дающих льготы при поступлении в высшие учебные заведения РФ (приказ Министерства науки и высшего образования РФ от 27.08.2020 № 1125)., весь Перечень олимпиад см.  на сайте РСОШ)

Олимпиада проводится по предметам: история, математика, физика, химия, русский язык, биология. 

Олимпиада проходит в два тура: отборочный (заочный, очный или интернет-тур, по выбору организаторов) этап и заключительный (очный) этап. Заключительный этап проводится одновременно в городах Н.Новгород, Саров, Ярославль, Белгород, Пенза, Красноярск, Екатеринбург,  Оренбург, Барнаул, Симферополь, Воронеж, Томск, Ставрополь. 

К участию в олимпиаде приглашаются школьники 7-11 классов. Необходимым условием участия в олимпиаде является согласие на обработку персональных данных, публикацию результатов олимпиады (с указанием персональных данных участников) и олимпиадных работ на данном сайте и сайтах вузов-организаторов! Участникам и их законным представителям необходимо ознакомиться с Порядком проведения олимпиад школьников (Приказ Минобра от 4.04.2014 №267) с изменениями (Приказ Минобра 10.12.2014 №1563).

Олимпиада проводится как в форме предметной олимпиады, так и в форме олимпиады с проектно-исследовательской компонентой («Харитоновские чтения» в г.Саров).

Календарь туров олимпиады (формы, сроки, задания, результаты) в 2020-2021 учебном году

Контакты:

 

Телефон Центрального Оргкомитета (831)4623777 (Долова Светлана Львовна). С 9 до 16 часов в будние дни. В выходные и вечером пишите на e-mail!

E-mail [email protected] (задавая вопросы, указывайте, в каком городе и по какому предмету Вы участвуете!)

Обращайтесь в Центральный Оргкомитет только если региональный Оргкомитет не смог ответить на Ваши вопросы!

Контакты региональных Оргкомитетов приведены на страничках этих городов.

отзывы, адрес, время работы, расположение на карте, посещаемость

Услуги водителя Олимп, Саров, Нижегородская обл., 607187:
10 отзывов
пользователей и сотрудников, подробная информация о адресе, времени работы, расположении на карте, посещаемости, фотографии, меню, номер телефона и огромное количество другой подробной и полезной информации

Адрес: Саров, Нижегородская обл., 607187

Расположение на карте

Отзывы

Анна Колодина

Супер класс!

2 месяца назад

Хуан Игнасио

Отличная мойка. Хороший персонал. Приемлемые цены

6 месяцев назад

Марина Рыбко

Не знаю за что им давали дипломы и награды. Цена услуг сейчас не соответствует качеству. Особенно хочется отметить плохое отношение мойщиков к своей работе. Раньше было иначе. Хотелось бы обратить внимание владельцев, что качество сервиса …

5 месяцев назад

Наталья Сулинова

Хороший автосервис

2 месяца назад

Оля Джусова

Мойка хорошая

5 месяцев назад

Оксана Теглецова

11 месяцев назад

Татьяна Кирьянова

5 месяцев назад

Петр Денисов

4 месяца назад

Евгений Лысцов

8 месяцев назад

Юлия Лящ

4 месяца назад

Популярные места из категории Услуги водителя

В Сарове сотрудники МЧС приняли участие в отборочном этапе соревнований «Пожарный Олимп»

На базе специальной пожарно-спасательной части №1 ФГКУ «Специальное управление ФПС № 4 МЧС России» состоялся отборочный этап соревнований пожарных и спасателей «Пожарный Олимп».

В состязаниях принимали участие сотрудники специальных пожарно-спасательных частей, допущенные к использованию средств индивидуальной защиты органов дыхания, имеющие право работать в непригодной для дыхания среде в дыхательных аппаратах, а также с механизированным инструментом.

Специальная дистанция включала в себя восемь упражнений. Участник соревнований находился на стартовой площадке перед стеллажом с боевой одеждой пожарного и дыхательным аппаратом. По команде судьи-секундометристы включали секундомеры, участник приступил к выполнению первого и последующих упражнений.  Он  надел боевую одежду пожарного и включил дыхательный аппарат, прошел  дистанцию с физической нагрузкой: перемещение автомобильной покрышки от грузовика при помощи ударов кувалдой. Затем участник, взяв в каждую руку по грузу, проходил маршрут бег «змейкой».

Далее участник приступил к выполнению четвертого упражнения: кантование автомобильной покрышки от грузовика. После этого при помощи бензореза вскрывал металлическую дверь, закрытую на внутренний замок. Шестое упражнение заключалось в ликвидации условного очага пожара. Участник с наполненной рукавной линией со стволом продвигался на позицию ствольщика и поражал мишень. Дальше участник входил в ограничительную зону выполнения упражнения, и, не выходя из нее, с помощью веревки спасательной вытягивал из «тоннеля» манекен. После пересечения краем спинального щита кромки «тоннеля», участник отстегивал карабин, закрепленный за спинальный щит, и волоком, двигаясь спиной вперед, эвакуировал манекен за линию позиции ствольщика. В завершении дистанции участник преодолевал «тоннель», продвигаясь внутри него, и финишировал за линию финиша.

Для выполнения упражнения предоставлялась одна попытка. Результаты и правильность прохождения участниками специальной дистанции фиксировалась судейской бригадой.

В результате упорной борьбы победу одержал старший инструктор-пожарный специальной пожарно-спасательной части № 6, старший прапорщик внутренней службы Сергей Судаков.

Стоит отметить, что победитель отборочного этапа примет участие в открытых соревнованиях пожарных и спасателей «Пожарный Олимп» на территории федерального государственного автономного учреждения «Конгрессно-выставочного центра «Патриот» (г. Кубинка) в рамках проведения XIII Международного салона средств обеспечения безопасности «Комплексная безопасность 2021».

Целью организации и проведения соревнований является популяризация пожарного дела, мотивация личного состава пожарной охраны к повышению уровня профессионального мастерства, развитие физической культуры и спорта, укрепление здоровья и повышение психологической устойчивости к действиям в чрезвычайных ситуациях.

Автосервисы, техцентры, СТО в Сарове

В категории ‘Автосервисы в Сарове’ размещены 30 ед. предприятий. Чтобы подобрать ближайшие СТО от вас воспользуйтесь картой или найдите по отзывам и рейтингу. Есть с пометкой круглосуточный и фото. Узнать стоимость и записаться можно по телефону и приехав на адрес размещённый на портале. Мы наблюдаем за актуальностью информации и комфортом использования портала. Также возможно подобрать по наличию дополнительных сервисов как: Бесплатный Wi-Fi, Зона ожидания, Кофе/буфет

Популярные марки

Сервисы с лучшим рейтингом

Брассика

Россия, Нижегородская область, Саров, улица Димитрова, 18С9

Саров Тюнинг

Нижегородская обл. , Саров г., ул. Димитрова, 20а, эт. 2

ТехАвто

Приволжский федеральный округ, Республика Мордовия, Саров, ул. Маяковского, 2

Олимп

Нижегородская обл., Саров г., Варламовская дорога 5А

Автосервис GoshAN

Республика Мордовия, Темниковский р-н, Саров, ул. Силкина, 48

Kolobox

Нижегородская область, Саров, улица Кирова, 11

Саров-авто

Нижегородская обл., Саров г., ГСК № 3, проезд  6а, блок 6-8

КолесоС

Россия, Нижегородская область, Саров, улица Зернова

Саров-Лада

Нижегородская обл., Саров г., ул. Силкина, 48

Юг-Авто

Нижегородская обл., Саров, ул. Московская, 98

Berloga

Россия, Нижегородская область, Саров, Старый район

Автоцентр

Нижегородская обл., Саров г., Малая Коммунальная дор., стр. 4

Автостекло+

Нижегородская обл., Саров г., 6-й пр-д, ГК № 3, блок 13, 14

Kranzle

Россия, Нижегородская область, Саров

Hunter

Россия, Нижегородская область, Саров

Hanter

Нижегородская обл., Саров г., ул. Зернова

Автоэлектрика

Россия, Нижегородская область, Саров, Большая Коммунальная дорога

Мегамойка

Россия, Нижегородская область, Саров, Малая Коммунальная дорога

Trommelberg

Россия, Нижегородская область, Саров, Старый район, улица Духова

Первенство МФС Приволжье

Календарь игр Финала Первенства МФС Приволжье по мини-футболу среди юношеских команд 1993-1994 г. р. и 1995-1996 г.р.

Календарь игр Финала Первенства МФС Приволжье по мини-футболу среди юношеских команд 1993-1994 г.р. и 1995-1996 г.р.

ФОК Мечта

 

 

 

 

Юноши 1993-94 г.р

№	Команда	1	2	3	4	Очки	Мячи	Место
1	Олимп УОР Пенза		4-2	3-1	1-0	9	8-3	1
2	МФК Саров Нижегородская обл	2-4		3-4	1-2	0	6-10	4
3	Орбита Бавлы	1-3	4-3		0-3	3	5-9	3
4	ЦДЮСШ Саратов	0-1	2-1	3-0		6	5-2	2

 

Юноши 1995-96 г. р.

№	Команда	1	2	3	4	Очки	Мячи	Место
1	Олимп УОР Пенза		8-3	3-4	4-0	6	15-7	1
2	МФК Саров Нижегородская обл	3-8		6-7	4-7	0	13-22	4
3	Факел Нижегородская обл	4-3	7-6		3-4	6	14-13	2
4	СДЮСШОР 14 Саратов	0-4	7-4	4-3		6	11-11	3

 

15 февраля, понедельник

1. 13-30 Олимп УОР – ЦДЮСШ                         93-94                 

2. 14-30 МФК Саров – Орбита                            93-94

3. 15-30 Олимп УОР – СДЮСШОР 14         95-96

4. 16-30 МФК Саров – Факел                         95-96

 

16 февраля, вторник

5. 10-00 ЦДЮСШ – Орбита                            93-94

6. 11-00 Олимп УОР – МФК Саров               93-94

7. 12-00 СДЮСШОР 14 – Факел                    95-96

8. 13-00 Олимп УОР – МФК Саров               95-96

 

17 февраля, среда

9. 10-00 МФК Саров – ЦДЮСШ                    93-94

10. 11-00 Орбита – Олимп УОР                      93-94

11. 12-00 МФК Саров – СДЮСШОР 14        95-96

12. 13-00 Факел – Олимп УОР                        95-96

 

Лучшие игроки

Юноши 1993-1994 г.р.

Вратарь – Трушкин Игорь (Олимп-УОР)

Защитник – Ильдеров Валерий (Орбита)

Нападающий – Калачев Александр (МФК Саров)

Бомбардир – Исмаилов Элнур (ЦДЮСШ)

Игрок – Домашевский Сергей (Олимп-УОР)

 

Юноши 1995-1996 г.р.

Вратарь – Ойкин Дмитрий (Факел)

Защитник – Пузанов Александр (МФК Саров)

Нападающий – Хайкин Андрей (СДЮСШОР 14)

Бомбардир – Кирпичев Юрий (Факел)

Игрок – Заболонков Андрей (Олимп-УОР)

 

 

Дешевые авиабилеты в Саров (null),

Возможно, вы ищете дешевые авиабилеты в Саров для столь необходимого отпуска, или вам просто нужно заехать, чтобы увидеться с родственниками. В любом случае, мы говорим о том, что семейное воссоединение будет незабываемым. Расскажите слишком много историй в баре отеля. Едете по работе? Раздави это. Если вы лягте и расслабитесь без мобильного телефона, мы не узнаем.

В конце концов, вы хотите выиграть много и отлично провести время, верно? Полеты — это небольшая часть всего приключения. Мы это понимаем.Куда бы вы ни хотели отправиться — или куда бы вы ни уехали — начните эту историю с дешевых рейсов Hotwire в Саров.

Не знаете, как получить лучшую цену на билеты на самолет в Саров?

Мы знаем, что есть поклонники авиакомпаний. Если вы не знаете эту отрасль как свои пять пальцев, не волнуйтесь. Наши советы по бронированию помогут вам сэкономить деньги.

Искать рейсы в Саров в определенные дни недели

Для большей экономии рассмотрите возможность вылета в среду, четверг или субботу.Вернитесь в воскресенье, вторник или среду. Международные предложения часто доступны во время вылета с понедельника по четверг.

Измените свои дни на более дешевые поездки на выходные

Вылет в четверг и возвращение в воскресенье обычно дешевле, чем прилет в пятницу и возвращение в понедельник.

Останьтесь на ночь в субботу, чтобы поиграть больше

Проведение выходных в пункте назначения обычно приводит к снижению стоимости авиабилетов. Мы все за это.

Рассмотрите альтернативные аэропорты при поиске рейсов в Саров.

Другие близлежащие аэропорты могут предлагать тарифы, отличные от ваших текущих результатов поиска.Нажав «Ближайшие аэропорты» после первоначального поиска, вы увидите список ближайших вариантов.

Видите тариф, который вам нравится? Внезапно атаковать!

Скоординируйте свои действия со своими попутчиками перед поиском, и вы сможете действовать быстро, когда придет время бронировать. Цены на авиабилеты часто меняются за считанные минуты. Мы знаем, что вы ищете лучшие цены, но все остальные тоже! Если сделка правильная, поймайте ее и ощутите сладкое удовлетворение от победы.

Летайте в межсезонье

В определенные места назначения особенно много рейсов в определенные сезоны.Например, летом популярны Европа, Гавайи и Аляска. Флорида, Новый Орлеан и Южная Калифорния наиболее популярны весной. Зима — лучшее время для Мексики и Карибского бассейна, а также для лыжных и сноубордических направлений, таких как Скалистые горы Колорадо. Осенью посетителей привлекают Северная Калифорния, Тихоокеанский Северо-Запад и Новая Англия. Полеты в менее популярные периоды могут означать дополнительные деньги в вашем кошельке — да, пожалуйста!

Пресинаптическое ингибирование дофаминовых нейронов контролирует оптимистическую предвзятость

Существенные изменения:

1.Рисунок 1B — важная основа всей работы. Учитывая, что температура может значительно повлиять на способность к обучению с аппетитом, группы родительского контроля при температуре 18 ° C должны быть завершены.

Мы согласны с точкой зрения рецензента, что температура может существенно повлиять на работоспособность мух. Таким образом, мы провели контрольный обучающий эксперимент с использованием тех же генотипов, выращенных при 18 ℃, чтобы разрешить GAL80 [ts] супрессию трансгенных РНКи. Статистических различий между генотипами не наблюдалось, что свидетельствует о физиологическом, а не о влиянии ГАМК-B-R3-KD на повышение производительности на развитие.Эти новые данные теперь включены в рисунок 1B.

2. Поскольку стратегия РНКи может иметь проблему нецелевого действия, полезно проверить эффективность ГАМК-B-R3-РНКи с помощью Q-ПЦР или другой независимой линии РНКи GABA-B-R3.

Рецензент мог их не заметить, но мы действительно включили последовательные поведенческие данные с использованием «второго» штамма РНКи в нашу оригинальную рукопись. Они представлены на Рисунке 1 — дополнении к рисунку 1B.

3.Значительное внимание необходимо уделить визуализации кальция активных зон DAN на рис. 3. Каково, по мнению авторов, биологическое значение большего размера кластера? Также неясно, как это увеличение связано с поведенческими результатами в отношении обобщения. Учитывая, что эти паттерны вызываются запахом, а не вознаграждением, как мы можем понять их роль в пластичности, связанной с обучением? Их необходимо уточнить, поскольку на стр.10, строки 8-10, они пишут: «Эти результаты предполагают, что функция ГАМК-B-R3 на пресинаптическом окончании необходима для тонкой пространственной регуляции сигнала вознаграждения».Однако в их экспериментах не исследуется сам сигнал вознаграждения. Далее, авторам необходимо прояснить, считают ли они увеличение размера кластера просто отражением большей амплитудной активности в этих клетках, или же рекрутируются новые «активные зоны», когда ингибирование блокируется. Увидят ли они такое же увеличение, просто используя более высокую концентрацию запаха? Простое увеличение активности DAN может потенциально иметь тот же эффект на память, что и «размытие активности DAN», но авторы не понимают различия в тексте.

Мы благодарим рецензента за то, что он поднял эти важные потенциальные проблемы, поскольку эти объяснения действительно были нечеткими. Мы внесли существенные изменения в текст рисунка 3, чтобы лучше объяснить, почему мы характеризуем паттерны кальция в активной зоне в терминалах PAM. Теперь он распространяется на 4 абзаца (P5, L119-P12, L256).

Рецензент также поднял интересный вопрос относительно интерпретации увеличения размера кластера (рис. 3F). Мы сделали диаграмму рассеяния, чтобы проанализировать взаимосвязь между размером пика и интенсивностью сигнала кальция (изображение ответа автора 1).Это не выявило четкой корреляции между ними. Более того, аналогичный график для терминалов нокдауна GABA-B-R3, которые реагировали на стимуляцию запаха большим увеличением содержания кальция, не показал большей корреляции (даже немного меньшую зависимость, наоборот [наклон регрессии: 0,0543 против 0,0517 у мух WT и GABA-B-R3-KD соответственно]). Это говорит о том, что размер кластера контролируется другим механизмом (ами), чем амплитуда (см. Также изображение ответа автора 2). Одной из таких возможностей может быть привлечение соседних активных зон.Теперь мы добавили эту информацию в измененный текст (P12. L247-P12. L249)

Диаграммы разброса, показывающие зависимость между размером (абсцисса) и интенсивностью (ордината) каждого пика, рассчитанного описанным нами методом.

Каждый кружок представляет отдельный кластер в 9 кадрах до стимуляции одной репрезентативной мухи.

Карта значений кластера.

Каждый кластер имеет цветовую кодировку по средней интенсивности связанных пикселей. Слева: контроль, справа: GABA-B-R3-KD.

4. Есть важные технические проблемы с отдельными панелями на Рисунке 3.

Рисунок 3A: Нет подтверждения того, что эти точки являются отдельными активными зонами. Должна быть некоторая совместная локализация с другими пресинаптическими белками, чтобы даже начать это направление. И почти наверняка не хватает разрешения, чтобы сказать, что это отдельные зоны зоны действия (осевое разрешение составляет не менее 4 микрон, поэтому почти наверняка на их изображениях много зон зоны действия, сжатых одна на другую). Эту проблему можно решить с помощью более взвешенного текста в тексте (т.е.не пишите «мы измерили приток кальция в отдельные активные зоны» стр.5 строка 20-21).

Следуя предложению, мы изменили соответствующий текст, предоставив более фактическое описание результата (P5, L120, P8, L163-165).

Мы проверили локализацию датчика в активных зонах в терминалах PAM. Сенсор кальция слит с brp-short (Kiragasi et al., Cell Rep 2017), широко принятой молекулярной меткой для локализации в активной зоне. В то время как моноклональное антитело против Brp (nc82) не распознает короткий Brp ^{в датчике (Schumid et al., Nat Neurosci, 2008), Brp short :: GCaMP6s :: mCherry, экспрессируемый в нейронах PAM, красиво колокализованных с сигналом nc82, что указывает на интеграцию сенсора в нативные активные зоны. Эта правильная интеграция сенсоров согласуется с наблюдениями в двигательных нейронах (Kiragasi et al., Cell Rep 2017). Теперь мы представляем эти новые данные в новой редакции (P8, L165-167, Рисунок 3 — приложение к рисунку 1A).}

Рис. 3B. Каким образом GABAR-нокдаун расширит распределение на нижнем конце (левая часть оси x)? Мы можем видеть, как это увеличило бы среднюю интенсивность, но кажется, что оба конца распределения расширяются в этом анализе.Насколько сильный эффект? Видно с другим набором из 9 кадров? Почему анализировать только 9 кадров, почему не анализировать все кадры?

Поскольку распределения интенсивности на Рисунке 3B являются репрезентативными примерами, не имеет особого смысла обсуждать расширенные хвосты у этой нокдауновой мухи. Цель и смысл этих рисунков 3B и 3C — показать, что GABA-B-R3 необходим для регуляции конечных уровней кальция. Теперь мы упоминаем тенденцию к более широкому распределению сигналов Brp :: GCaMP6s :: mCherry после нокдауна в дополнение к увеличенным временным колебаниям, что указывает на снижение устойчивости.Кроме того, мы даем текстовые пояснения относительно этих анализов (P8. L173-180).

Рисунок 3D — это запутанный способ представления данных изображений. Мы бы предпочли посмотреть видео или тепловую карту dF / F на пиксель, показывающую, как выглядели ответы на стимулы. Я также не вижу биологического значения уменьшенной обратной корреляции между средним значением и стандартным отклонением при нокдауне GABAR.

Поскольку среднее значение и стандартное отклонение являются первичными статистическими данными, которые представляют распределение Гаусса, мы сопоставили наши данные в виде логарифма среднего значения vs.sd (рисунок 3E). Хотя биологическое значение наблюдаемой обратной корреляции неясно, это предполагает, что каждый человек имеет уникальную «заданную точку» уровня активности и неоднородности в дофаминовых окончаниях, и такой контроль требует GABA-B-R3. Структура этих заданных значений среди людей может иметь отношение к состоянию «критичности» системы для эффективной обработки информации (например, Hesse and Gross, 2014; Ezaki et al., Communications biology 2020). Мы упомянули об этом в легенде рисунка (P9, L194-196, P10, L202-205).

Учитывая движение образца во время измерения, пиксельный dF / F не будет эффективным подходом. Для удобства читателя мы добавили отдельные кривые среднего и стандартного отклонения на основной рисунок исправленной рукописи (рис. 3D). Исходные файлы для нашего анализа также размещены в Интернете (https://gin.g-node.org/Nobu/Yamagata_Data_Source).

Напомним, что одним из существенных преимуществ использования сенсора Brp :: GCaMP6s :: mCherry является то, что каждая молекула имеет ссылку на mCherry.Это делает измерение более устойчивым к артефактам движения и уровням чувствительности датчика (P8. L163-165).

Рис. 3E и F. Каковы размеры кластеров в микронах, а не в условных единицах? На Фиг.3F разница в размерах кластеров + -ГАБАР РНКи очень мала. Если исходить из того, как они рассчитывали, каким должен быть « нормализованный размер кластера », то разница между нулевым распределением размеров и их наблюдениями в WT (1,055 -1) меньше, чем разница + — GABAR RNAi (1.065-1.055). Так действительно ли это значительная разница? Имеет ли смысл выражаться в физическом расстоянии?

Поперечное разрешение наших изображений составляет 0,33 мкм / пиксель, что дает физические размеры кластеров 0,536 и 0,544 мкм. ² для контрольных образцов и образцов GABA-B-R3 KD соответственно. Поскольку мы нормализовали эти значения со средним размером кластера случайно перетасованных изображений, эти значения не имеют единицы.

Для дальнейшей поддержки этого анализа размера кластера мы исследовали другие показатели, т.е.е., размер пика, который количественно определяет размер ярких пикселей (ярче, чем 95 процентиль всей интенсивности пикселей в данной области интереса). Таким образом, этот показатель не зависит от общей интенсивности, но также позволяет количественно оценить тонкость рисунка. Этот показатель также подтвердил наш вывод: GABA-B-R3 KD вызывал большие размеры пиков. Эти новые данные теперь включены в текст (P12 L249-254) и дополнительный рисунок (Рисунок 3 — приложение к рисунку 1F).

Насколько различаются значения dFF между кластерами? Графика на рис. 3Е имеет цветовую кодировку по размеру кластера (в пикселях), а не по амплитуде ответа.

Мы нанесли на карту содержание кальция в каждом кластере, но не обнаружили четкой корреляции с размером кластера (изображение ответа автора 2). Как показано на изображении ответа автора 1, амплитуда плохо объясняет размер кластера.

В целом было бы намного информативнее просто показать увеличенное изображение области интереса, отображая наблюдаемые ими значения dFF.

По причинам, которые мы уже обсуждали в нашем ответе на комментарий 4 выше, мы в основном сосредотачиваемся на покадровом пространственном паттерне активности кальция в активной зоне.

5. Общий технический комментарий, на который следует обратить внимание: не приведет ли увеличение амплитуды отклика естественным образом к увеличению размеров кластера, поскольку больше сигнала, выходящего из-под фона? Если бы авторы посмотрели на более высокую интенсивность запаха, увидели бы они также увеличение размера кластера?

По сути, это та же проблема, о которой мы говорили выше (изображения ответов автора 1 и 2).

Важные моменты интерпретации экспериментов:

6.Важно отметить, что эксперименты на Рисунке 3 смотрят не на реакцию DAN на вознаграждение (сахарозу), а на реакцию запаха. Непонятно, причем тут пластичность. На весь этот вопрос лучше посмотреть ответы на сахарозу.

По сути, это повтор первой части пункта 3 выше. Эти объяснения действительно были неясными. Мы внесли существенные изменения в текст рисунка 3, чтобы лучше объяснить, почему мы характеризуем паттерны кальция в активной зоне в терминалах PAM.Теперь он распространяется на 4 абзаца (P5, L119-P12, L256).

Судя по тексту на стр.10, строки 1-3, авторы думают, что измеряемый ими кальций в терминалах DAN отражает запах, т. Е. Отличается для разных запахов. Предполагается, что увеличение размера кластера снижает сложность рисунка и, опять же, делает рисунки для разных запахов менее различимыми. Однако, согласно стр.16, строка 20, эти кластеры получены из анализа 9 кадров перед стимуляцией.Итак, как они могли нести представление запаха (как заявлено стр.10, строки 1-3), если запах еще не был представлен?

Рецензент правильно понимает нашу точку зрения. Поскольку локальный приток кальция в активную зону в терминалах PAM отражает активность запаха KC, он должен быть связан с оценкой запахов.

Поскольку функциональная связь в состоянии покоя предсказывает, как схема выполняет задачи (например, Cole et al., Nat Neurosci, 2016), мы проанализировали ее базовую активность в терминалах PAM.В ответ на предложение рецензента мы проанализировали размер кластера во время стимуляции запахом. В самом деле, мы обнаружили увеличенный размер кластера в терминалах «нокдауна», что согласуется с исходной активностью (рис. 3G слева). Эти новые данные теперь представлены на основном рисунке (Рисунок 3G справа) и в тексте (P12. L244-247).

7. Насколько согласованы эти кластеры? Следует ли нам показывать результаты многократных представлений запахов, но, может быть, это не утверждение? Но разве они не должны хотя бы быть последовательными в разные моменты времени?

По запросу рецензента мы рассчитали размеры кластеров для всех кадров до и во время стимуляции запаха (изображение ответа автора 3).Результат ясно показывает, что у GABA-B-R3 нокдаун мух с течением времени постоянно увеличивается размер кластера.

Временные графики нормализованного размера кластера (слева) и сравнение генотипов с использованием всех кадров из фаз до и во время стимуляции (кадры 1-12, справа).

Усредненный размер кластера был постоянно выше у мух с нокдауном GABA-B-R3 по сравнению с мухами дикого типа.* P <0,05, критерий Манна-Уитни. N = 15, 11.

8. Нет метрики сложности паттернов, только размер кластеров. Насколько специфичны эти образцы запаха (насколько различны рассматриваемые запахи и насколько последовательны при повторных презентациях)?

Мы имели в виду пространственное «размытие» как более крупные локальные кластеры, но заменили это слово, чтобы избежать ненужной путаницы у читателей (P9, L190, P12, L255).

9. Наиболее вероятным объяснением их результатов является то, что сигнал вознаграждения становится сильнее и шире (подобно увеличению концентрации сахарозы). Но поскольку здесь они представляют реакцию запахов, мы не уверены, что они пытаются сказать, текст, описывающий их общую интерпретацию (стр.10), нелегко усвоить.

Спасибо за комментарий. Наша модель состоит в том, что сигнал сахарного вознаграждения глобально ингибируется в терминалах PAM с помощью GABA-B-R3 и локально растормаживается входом от представляющих запах KC, чтобы выборочно усиливать дофаминергические сигналы вознаграждения этим KC.Это было разъяснено в редакции текста (P12, L254-256) и в редакции панели с рисунками (Рисунок 4E).

10. На рисунке 4: Поскольку мухи с ГАБАР-РНКи начинают с более высоким баллом обучения, авторы должны компенсировать это при оценке того, являются ли они более обобщенными, чем контрольные. Обобщение очевидно на рисунке 4A, но на рисунке 4B красная линия кажется просто сдвигом вверх других линий. Разница в 50:50, возможно, не в увеличении обобщения, а просто в результате увеличения общего обучения.

Мы понимаем озабоченность рецензента. Чтобы оценить кривую обобщения независимо от интенсивности, мы нормализовали данные, разделив средний балл смеси 100: 0 (т. Е. Тестирование с обученным запахом), и получили практически те же результаты (изображение ответа автора 4). Значительное уменьшение генерализации запаха при смеси 50:50 было обнаружено в контрольных группах, но не в экспериментальной группе (изображение ответа автора 4). Таким образом, эти результаты согласуются с нашим предыдущим представлением и указывают на то, что GABA-B-R3 в терминалах PAM требуется для специфичности памяти с вознаграждением для изученного запаха.

Нормализованные обобщенные кривые с использованием смесей 4MCH: 2MCH (слева) и 3OCT: 1OCT (справа).

Статистика показывает, что экспериментальная группа демонстрирует измененную специфичность памяти к усвоенным запахам по сравнению с группами родительского контроля. (4MCH: 2MCH) R58E02-GAL4 / +, p = 0,030; UAS-GBR3-RNAi / +, p = 0.006; R58E02-GAL4 / UAS-GBR3-RNAi, p = 0,972. N = 8-17. (3OCT: 1OCT) R58E02-GAL4 / +, p = 0,002; UAS-GBR3-RNAi / +, p = 0,006; R58E02-GAL4 / UAS-GBR3-RNAi, p = 0,500. N = 8-20. Тест множественных сравнений Тьюки.

Чтобы подтвердить результат с нокдауном рецептора, мы провели новую серию обобщающих экспериментов по подавлению синтеза ГАМК в нейронах APL. Поразительно, что мухи APL-GAL4 / UAS-GAD1-RNAi показали значительно широкий профиль генерализации, очень похожий на результаты нокаута GABA-B-R3 в нейронах PAM (рис. R9).Мы подтвердили это расширенное обобщение двумя разными запахами (рис. R9). Теперь мы добавили эти новые данные в исправленный текст (P12. L263-264; Рисунки 4C, 4D).

https://doi.org/10.7554/eLife.64907.sa2

предстоящих туров | Korluka Studios

Маршрут по Святой Земле, осень 2017 (закрыто — ожидание следующего паломничества в Россию / Святую Землю, которое состоится в конце 2018 или начале весны 2019 года)

Прибалтика и не только: в погоне за наследием Великого княжества

с о.Игорь (священник Византийской католической церкви Святого Иоанна Крестителя, уроженец Беларуси)
и Дебра Корлука (международный византийский иконописец)

Когда-то была великая страна, простирающаяся от Балтийского до Черного моря и служившая форпостом европейской цивилизации: Великое княжество Литва (Литва). Он охранял Европу от различных вторжений Востока. Мы рады пригласить вас присоединиться к нашей группе в путешествии по ее наследникам — Беларуси, Литве и Латвии (и, возможно, Украине), чтобы увидеть увлекательные исторические скрытые жемчужины в Центральной и Восточной Европе.Америка — нация иммигрантов, и многие люди приехали в эту страну из мест, которые мы посетим: американский герой войны за независимость Тадеуш Костюшко; автор «Боже, благослови Америку», композитор Ирвинг Берлин и многие другие. Этот тур познакомит вас с искусством, замками, культовыми сооружениями, восточно-европейскими и американскими связями.

Даты: сентябрь 2015 г. (12-дневный тур)

Маршрут № 1:
Вильнюс (2 дня) — Гродно (1/2 дня) — Несвиж (1/2 дня с ночевкой) — Мир (возможно, ночевка, затем 1/2 дня) — Минск (2 дня) — Киев ( 3 дня)

Маршрут № 2:
Рига (2 дня) — Витипск (1 день) — Полоцк (1 день) — Минск (3 дня) — Вильнюс (3 дня)

В стоимость тура входит: подлежит уточнению

• Стоимость билета туда и обратно MSP (дополнительная страховка)
• Наземный трансфер (автобус или поезд)
• 9/10 ночей (двухместное размещение)
• 2-разовое питание
• Вход на все объекты по маршруту
• Чаевые, чаевые и налоги
• Все гиды и сопровождающие

Свяжитесь со мной для получения дополнительной информации или для предварительной записи на поездку.

Sarov-eyðimörkin — tilbeiðslustaður heilags Serafim af Sarov — Samfélag

Нижний Новгород væðið er tolt af ögu inni. Ðað eru margir ein takir og jafnvel dulrænir taðir, einn eirra er borgin arov. Í mörg ár var ban

Эфни

Нижний Новгород svæðið er stolt af sögu sinni. Að eru margir einstakir og jafnvel dulrænir staðir, einn eirra er borgin Sarov.Í mörg ár var bannað jafnvel að minnast á ennan stað. Staðsetning borgarinnar var stranglega leynd. Í dag leitast fjöldi pílagríma við að heimsækja svo blessaðan stað og snerta helgidóma staðarins.

Сага Саровская эйðимеркуриннар

Саровская пустынь вар стофнаðур Иоанна Введенского монастыря. Frá örlátum guðföður sínum fékk hann að gjöf rjá tugi hektaralands í borginni Sarov (áður — Sarov byggðin). Hann sendi strax bréf til Moskvu þar sem hann bað um leyfi til að reisa kirkju á essu landi.Að er erfitt að finna betri stað fyrir slíka byggingu. Svo virðist sem náttúran sjálf á essum stöðum hafi fyllst friði og heilagleika. Ennfremur gerði góða staðsetningin auðvelt að komast til Нижний Новгород, Москву и Владимир.

Fljótlega var Свято-Успенская Саровская пустынь stofnuð á essu landi. Sérstök skipun Péturs I leyfði byggingu kirkju hinnar heilögustu Theotokos og hennar lífgjafarheimild þar sem áður var Mordovian byggð. Bygging kirkjunnar tók aðeins 50 daga. 29. июнь 1706 г. er talinn opinber dagsetning stofnunar slíks minnisvarða eins og Свято-Успенская Саровская пустынь.

Sarov hellar

Byggingu klaustursins fylgdi bygging neðanjarðarborgar, sem einnig var byggð þökk sé Hieroschemamonk John. Á eim tíma bjó hann í einum af fjallahellunum. Svo uxu hellarnir og frumum var raðað í á til einveru og sökktar í bæn. Árið 1711 var kirkjan heilags Anthony og Theodosius reist neðanjarðar.

Sarov-eyðimörkin fylltist af lífi. Frá öllum borgum komu nýliðar og munkar hingað. Öllum var gefin vinna. Einhver sinnti þjónustu, einhver tók þátt í byggingu nýrra frumna, einhver tíndi ber og sveppi.Svo smám saman myndaðist heil borg umhverfis kirkjuna, sem þjónaði sem frumgerð klaustursins.

Á eim tíma teiknaði John upp reglur klaustursins eftir ströngum reglum. Саров вар þekktur sem Akademíuklaustur. Eftir að hafa dvalið í klaustrinu héldu aska-munkarnir áfram og breiddu út Sarov-stofnskrána. Næstum öllum þeirra var síðan úthlutað af ábótum eða gjaldkerum í ýmsum klaustrum.

Líf Seraphim from Sarov

Sarov Hermitage var vegsamaður af mesta rússneska dýrlingnum Seraphim from Sarov.Fair hans tók ttátt í byggingu musterisins en skyndilegur dauði hans leyfði honum ekki að ná lokamarkmiðinu. Eftir andlát föur síns héldu Seraphim (með fæðingu Prokhor) og móður hans Agafya áfram byggingu dómkirkjunnar. Einu sinni gerðist kraftaverk á byggingarsvæði. Móðir yfirsá litla Prokhor og hann féll úr mikilli hæð en lifði af. Frá fyrstu æsku trúði Prokhor einlæglega á Drottin og heiðraði hann. Í alvarlegum veikindum í draumi sá hann hinn heilagasta Theotokos sem lofaði að lækna hann. Fljótlega gerðist það.

Síðan þá hefur Prokhor ákveðið að verja öllu lífi sínu Drottni.Árið 1776 kom hann í Sarov klaustrið. Átta árum eftir að hafa verið tógaður fyrir munki fékk Prokhor nafnið Seraphim sem ýddi „eldheitur“.

Эрмитаж

Nokkrum árum síðar flutti Seraphim til að búa í skóginum nálægt klaustrinu. Hann klæddi sig einfaldlega, borðaði það sem hann fann í skóginum og fastaði oftar. Hann eyddi hverjum degi í endalausar bænir og lestur fagnaðarerindisins.Skammt frá klefa sínum reisti Seraphim lítinn matjurtagarð og búgarð.

Nokkrum árum síðar lagði Seraphim Sarovsky á sig aðhald í formi riggja ára öggunar. Eftir a hann sneri stuttlega aftur til klaustursins en eftir 10 ár yfirgaf hann að aftur.

Slíkur lifnaðarháttur veitti Seraphim frá Sarov óvenjulega gjöf skyggni og getu til að lækna fólk. Ökk sé honum voru opnuð nokkur klaustur kvenna. «Нежность» táknið var síðasta myndin sem Seraphim sá í lífi sínu.

Dýrlingurinn var jarðsettur nálægt forsendukirkjunni.

Árið 1903 var Seraphim frá Sarov tekinn í dýrlingatölu. Síðan þá er staðurinn þar sem dýrlingurinn bjó stundum kallaður eyðimörk Serafím af Sarov.

Свято-Успенский клаустрий

Саровская пустынь er frægur fyrir Свято-Успенский клаустрий. Bygging musterisins var lögð árið 1897 egar Seraphim from Sarov var ekki enn tekinn í dýrlingatölu. Upphaflega vegsamaði bygging dómkirkjunnar heilaga þrenningu. Þar sem musterið var reist yfir klefa öldungsins var það kallað það.Eftir helgunarsetningu Seraphim from Sarov til kanón dýrlinga var musterið strax vígt. Etta er fyrsta dómkirkjan St Seraphim í Rússlandi.

Inni í kirkjunni var klefi dýrlingsins staðsett sem dýrasta helgidómurinn. Táknmyndin virtist frekar einföld. Það var hægt að gera hjáleið um klefann og jafnvel fara inn. Síðar var klefinn málaður og Set lítil hvelfing á Hann. Það var í formi kapellu.

Árið 1927 var dómkirkjunni lokað. Þessu var breytt í leikhús. Árið 2002 hófst endurreisnarstarf og ágúst 2003 hófst guðþjónusta í kirkjunni á ný.

Hvernig á a komast angað?

Öllum pílagrímum er ráðlagt að heimsækja jafn heilagan stað og Sarov-eyðimörkina. Hvernig á að komast á ennan stað?

Фра Нижний Новгород fara rútur til Дивеево от Shcherbinka strætóstöðinni. Einnig er stopp fyrir smábíla á Moskovsky járnbrautarstöðinni, sem ferðast einnig í essa átt. Á ferðalagi með bíl er einnig hægt að heimsækja hina fornu borg Arzamas.

Skoðunarferðabílar eru reglulega gerðir из Нижнего Новгорода в Дивеево.Þú getur bókað ferð og kynnt þér meira um ennan ótrúlega stað.

Í dag er Sarovskaya eyðimörkin safn. Allir sem vilja heimsækja sannkallaðan heilagan stað geta heimsótt hann.

животных | Бесплатный полнотекстовый | Жизнеспособность популяций и стратегии сохранения евразийского черного грифа (Aegypius monachus) в Юго-Восточной Европе

1. Введение

В последние годы скорость исчезновения видов во всем мире ускорилась и в тысячу раз выше, чем в результате одних только естественных процессов [1].Небольшие изолированные популяции особенно уязвимы перед исчезновением [2] из-за детерминированных и стохастических угроз [3]. Сохранение таких популяций является сложной задачей [4]. Грифы считаются наиболее опасными хищниками во всем мире [5,6]. Множество факторов, в том числе заражение ветеринарными препаратами [7,8], отравление [9,10,11], разрушение среды обитания [12] и низкая доступность продуктов питания [12,13,14], в сочетании с правилами и постановлениями [15] ], преследование людей [12], столкновения с ветряными турбинами [16], поражение электрическим током и столкновения с линиями электропередач [17], а также антропогенные нарушения [18] способствовали сокращению стервятников во всем мире.В Европе сокращение популяции стервятников началось в середине 19 века, что привело к локальному исчезновению некоторых видов [6]. В начале 21 века популяции стервятников демонстрировали более стабильную и немного увеличивающуюся тенденцию из-за изменений в европейском законодательстве [13] и интенсивного управления и сохранения [13,19]. Создание участков дополнительного кормления (SFS), реинтродукция, мониторинг и программы просвещения населения [20] дали обнадеживающие результаты. Создание SFS оказалось мощным инструментом управления для сохранения стервятников и других птиц, питающихся падалью [21,22,23,24,25], и помогло устранить угрозы, создаваемые ветеринарными препаратами [26], ядовитыми приманками. [6,27], а также управление утилизацией туш в соответствии с санитарным законодательством (Регламент CE 1774⁄2002) [14,19,22,28].Более того, очень многообещающей стратегией сохранения была успешная реинтродукция различных видов стервятников в части их европейских исторических ареалов. Бородатые грифы (Gypaetus barbatus) были повторно интродуцированы в Европейских Альпах [29] и Испании, грифы-грифы (Gyps fulvus) были выпущены во Франции [30], а евразийские черные грифы (Aegypius monachus) были повторно интродуцированы во Франции и в некоторых частях Пиренейского полуострова [31]. С точки зрения экосистемных услуг дополнительным стимулом является культурная услуга, предоставляемая стервятниками (т.е., экотуризм) [32]. Евразийский черный гриф — почти самый крупный хищник в мире, которому требуются большие подходящие для размножения районы [33]. Это одиночный вид, гнездящийся на верхушках взрослых деревьев. Этот вид во всем мире классифицируется как «находящийся под угрозой исчезновения» [34] и «находящийся под угрозой исчезновения» в Греции [35]. В течение 20-го века этот вид исчез из нескольких европейских стран [34,36] и в настоящее время показывает неравномерное распространение по континенту. В Юго-Восточной Европе этот вид гнездится только в Греции в Национальном лесном парке Дадиа-Лефкими-Суфли (далее DLS-NP) [21,35,37].Когда-то распространенный по всей континентальной Греции вид, евразийский черный гриф резко сократился после 1950 года [38] (рис. 1). За исключением Фракии, этот вид был обычен в Фессалии и особенно на горах Олимп и Отрис. В 1984 г. на территории ДЛС-НП вид насчитывал 24 особи (10 гнездящихся пар) [21]. В тот же период популяция Олимпа состояла из 7 особей (2 гнездящихся пары), которые вымерли в 1990-е годы. В 1987 г. в DLS-NP был создан участок дополнительного кормления (SFS), чтобы усилить популяцию вида, которая в 1997 г. увеличилась до 59 особей (21 гнездящаяся пара) [21].Однако до 2005 г. численность населения существенно не увеличивалась, вероятно, из-за незаконного использования отравленных приманок в этом районе [37]. В течение последнего десятилетия популяция еще больше увеличилась, и в 2020 г. в этом районе насчитывалось 120–130 особей (35 пар) [31].

Целью нашего исследования было оценить вероятность сохранения изолированной популяции евразийского черного стервятника в Юго-Восточной Европе и изучить факторы, влияющие на популяцию, в частности, отравление, сокращение дополнительного кормления и увеличение количества ветряных электростанций.Кроме того, мы стремились оценить эффективность двух сценариев сохранения: (а) популяционная тенденция при отсутствии ГЛС в 1987 году и (б) жизнеспособность повторно интродуцированной популяции в Национальный парк Олимп с целью улучшения сохранения видов. статус в регионе и влиять на текущее управление, защиту и сохранение видов в Юго-Восточной Европе.

4. Обсуждение

Наши результаты по базовому сценарию показывают, что популяция евразийского черного стервятника жизнеспособна в течение следующих 100 лет при текущей стратегии сохранения.Однако альтернативные сценарии предполагают, что исчезновение может произойти. Различные уровни отравления показали прогрессивную возможность исчезновения. Кроме того, среднее и высокое сокращение дополнительных кормов, а также создание большого количества ветряных электростанций отрицательно повлияли на рост населения и предсказали его исчезновение. Более того, создание SFS в 1987 г. положительно повлияло на популяцию, о чем свидетельствует положительная тенденция, в то время как отсутствие SFS предсказывало умеренный рост популяции и низкую вероятность исчезновения.Наконец, 80 молодых стервятников могут быть удалены в течение 10 лет (8 особей в год) из текущей популяции, чтобы сформировать новую жизнеспособную реинтродуцированную популяцию в Национальном парке Олимп.

Отравление считается одной из самых серьезных угроз для стервятников в Европе [9,11,28,31,53,54]. Наши результаты показали, что отравление является наиболее важным фактором, негативно влияющим на популяцию евразийского черного стервятника в районе DLS-NP, что приводит к высокой вероятности исчезновения при средних (94.8% вероятность исчезновения) и высокие (100% вероятность исчезновения) уровни отравления. В Юго-Восточной Европе массовые отравления привели к гибели многих стервятников [53,55]. Наши результаты предполагают, что отсутствие контроля может привести к исчезновению вида с территории. Широкое использование незаконных ядовитых приманок для искоренения плотоядных животных (включая волков и собак) является основной причиной отравлений стервятников на Балканах [53,55]. Повторное появление волков в течение последнего десятилетия привело к появлению туш, доступных стервятникам, которые, в свою очередь, использовались в качестве отравляющих приманок различными социальными группами [56], что привело к гибели видов падальщиков [53,55].Смертность взрослых особей — решающий фактор, влияющий на птиц-некрофагов и устойчивость их популяций [57]. Взрослые особи страдают большей смертностью из-за их доминирования над тушкой и приоритета кормления. Побочные эффекты отравления могут быть уменьшены за счет включения большего количества пунктов кормления стервятников. Дополнительное кормление считается безопасным источником пищи [6,27]. Однако, несмотря на интенсивное использование SFS DLS-NP, евразийские черные грифы демонстрируют высокую мобильность и продолжают эксплуатировать обширные территории за пределами национального парка в поисках пищи (чел.обс.). Евразийские черные грифы из Греции были замечены в путешествии в Болгарию в поисках пропитания. За пределами Греции существуют традиционные системы разведения скота, благоприятствующие присутствию различных видов некрофагов, таких как грифон и египетский гриф [58]. С другой стороны, случаи отравления за пределами Греции довольно распространены, и подверженность стервятников отравленным приманкам относительно высока [53]. Создание сети ГЛС через Фракию и Болгарию будет способствовать более безопасному расселению этого вида и поможет предотвратить случаи отравления [53].На использование кормовой станции взрослыми европейскими черными грифами положительно влияет наличие близлежащих кормовых станций [24]. Таким образом, эксплуатация второй ГПС в районе ДЛС-НП и создание новой ГПС приведет к увеличению запасов продовольствия, безопасных от яда, и, следовательно, к увеличению пропускной способности района. В результате, этот вид мог колонизировать соседние регионы благодаря наличию подходящих мест для гнездования [59]. Пищевые запасы и места для гнездования определяют способность хищных птиц в большинстве сред оносить.Следовательно, размножение вида может быть ограничено, если не хватает одного из этих факторов [5]. Наши результаты показывают, что наличие пищи является решающим ограничивающим фактором, влияющим на популяцию евразийского черного грифа в DLS-NP [21], в то время как места гнездования многочисленны. Наши результаты показывают, что, если бы кормовая станция не была создана в исследуемом районе в 1987 году, популяция евразийского черного стервятника сократилась бы и подверглась риску исчезновения 7% в течение следующих 100 лет.Создание SFS имело решающее значение для выживания этого вида в Греции из-за низкого поголовья скота в тот период. Более того, если бы вид не поддерживался дополнительным кормлением, европейская санитарная политика оказала бы разрушительное воздействие на популяцию из-за ликвидации имеющихся запасов пищи [13,15,19]. Следовательно, этот вид, вероятно, будет более редким или исчезнет из страны. Рестораны с грифом обсуждаются во всем мире из-за положительных и отрицательных эффектов прикорма [10,15,47].В случае евразийского черного стервятника в Греции дополнительное кормление имело положительный эффект на сохранение вида [21]. После создания ГЛС в 1987 году население увеличилось с 20 до ок. 130 особей в 2020 году, при этом риск исчезновения значительно снизился из-за повышения плодовитости и снижения смертности. Кроме того, население может еще больше увеличиваться и, таким образом, служить защитой от случайных событий и, возможно, даже стать источником для окружающих регионов / стран.Анализ чувствительности показал, что значительное сокращение дополнительного питания может негативно повлиять на популяцию и указывает на 18,6% вероятность исчезновения. Дополнительное кормление усиливает естественную доступность пищи [10] и увеличивает выживаемость до взросления, таким образом, представляет собой важную практику управления для сохранения стервятников в Европе [25]. Негативное воздействие на птиц-некрофагов, возникающее в результате нового обращения с тушами, можно смягчить за счет дополнительного кормления [14,19], в то время как хранение туш стервятников в защищенных и огороженных местах разрешено европейским законодательством [60].Ветряные фермы представляют большую опасность для хищных птиц и особенно стервятников [16,61]. Увеличение ежегодной смертности на 10–20% по возрастному классу не повлияло на динамику популяции евразийского черного стервятника в Греции. Однако увеличение смертности примерно на 40% привело к среднему риску исчезновения (17,4%) в течение следующих 100 лет. В нынешней ситуации популяция стервятника имеет положительную динамику и не имеет возможности исчезновения. Принимая во внимание, что Восточная Фракия была охарактеризована как приоритетный район ветряных электростанций, будущее увеличение количества ветряных турбин в этом районе может привести к увеличению количества столкновений с птицами и, как следствие, к более высокому уровню смертности.Согласно этому сценарию, популяция евразийского черного стервятника будет трудно восстанавливаться, и ее исчезновение может ускориться. Чтобы избежать такого увеличения уровня смертности, вызванного работой ветряных турбин, следует применять план территориального управления. По всей Европе применяются руководящие принципы создания ветряных электростанций за пределами чувствительных к дикой природе зон [16,62]. Кроме того, в региональном масштабе предлагается разработать карты чувствительности конкретных видов для эффективного размещения ветряных турбин [62].В 21 веке реинтродукция вида в районы, где они раньше существовали, является полезным инструментом управления в природоохранной биологии [63]. Успех программы реинтродукции зависит от количества и возраста освобожденных лиц [49], устранения угроз [29] и систематического мониторинга освобожденных лиц [64]. Евразийский черный гриф — это вид, который был успешно повторно интродуцирован в некоторых частях его исторического европейского ареала [31]. В соответствии с нашим сценарием реинтродукции, в общей сложности 80 молодых черных грифов Евразии составят основу новой популяции в Национальном парке Олимп.Отбор молоди является хорошей практикой для реинтродукции стервятников, как это было продемонстрировано на примере евразийского черного стервятника во Франции [49] и бородатого стервятника в Альпах [41]. Однако некоторые рекомендуют реинтродукцию только взрослых особей, как, например, в случае белоголового сипа на юге Франции [65]. Молодые стервятники были выбраны потому, что не было значительных различий в стохастической скорости роста исходной популяции до и после их удаления. Национальный парк Олимп представляет собой бывшую зону размножения этого вида, обеспечивая хорошее количество традиционных гнездовий.Отсутствие животноводства на территории национального парка защитит население от незаконно отравленных приманок, которые фермеры используют для уничтожения крупных плотоядных животных [54]. Кроме того, наличие корма в этом районе является приемлемым из-за присутствия диких копытных, таких как балканская серна (Rupicapra rupicapra), косуля (Capreolus capreolus) и дикий кабан (Sus scrofa). Кроме того, дополнительное питание является ключевым фактором для поддержки вновь завезенных особей [29]. Следовательно, создание кормовой станции обеспечит успех реинтродукции новой популяции евразийского черного стервятника, а также поможет в мониторинге.Мониторинг новой популяции необходим для оценки успешности реинтродукции [49].

Более быстрая сегментация эмбрионов за счет повышенной передачи сигналов Delta-Notch

Животные и эмбрионы

Взрослые особи рыбок данио ( Danio rerio ) в рыбных хозяйствах Института молекулярной клеточной биологии и генетики им. Макса Планка и Университетского колледжа Лондона содержались при температуре 28 ° C пресная вода при световом периоде 14:10 ч: темнота. Эмбрионы собирали в течение 30 мин после оплодотворения и инкубировали в чашках Петри со средой E3.До желаемых стадий развития ⁴⁸ эмбрионы инкубировали при 28,5 ° C. Для гибридизации in situ (ISH) цельного монтированного образца, PTU (1-фенил-2-тиомочевина) в конечной концентрации 0,003% добавляли до 12 ч.ф. для предотвращения меланогенеза. Все WT были AB , если не указано иное, и использованный мутантный аллель deltaD был aei ^{tr233 16} , скрещенных с тем же фоном AB . Эксперименты с рыбками данио проводились в строгом соответствии с этическими нормами и правилами Министерства окружающей среды и сельского хозяйства Саксонии в Германии по лицензии Az.74-9165.40-9-2001, и Министерство внутренних дел Великобритании в соответствии с лицензией на проект PPL № 70/7675.

DAPT-лечение и эксперименты по отслеживанию импульсов

DAPT-лечение проводилось, как описано ранее ¹¹ . Вкратце, 50 мМ исходный раствор DAPT (Merck) готовили в 100% DMSO (Sigma) и хранили в небольшом объеме при -20 ° C. Эмбрионы в их хорионах переносили в 12-луночные планшеты со скоростью 2 л.с. в 1,6 мл среды E3 по 20 эмбрионов на лунку. Непосредственно перед обработкой готовили всего 50 мкМ DAPT в среде E3.Для предотвращения осаждения исходный раствор DAPT добавляли в среду E3 при перемешивании на вортексе, а затем фильтровали через шприцевой фильтр PES с размером пор 0,22 мкм (Millipore). Лечение DAPT было начато на стадии купола (4 ч.п.ф.) путем замены среды E3 на среду E3 / DAPT. Для экспериментов с отслеживанием импульсов DAPT промывали по крайней мере дважды свежей средой E3 + 0,03% PTU. Эмбрионы были дехорионированы и зафиксированы при 36 л.с. Все эксперименты инкубировали при 28,5 ° C, за исключением коротких операций, например промывки, которые проводились при комнатной температуре.

Оценка дефектов сегмента и номер сегмента

Эмбрионы, окрашенные рибозондом cb1045 , маркирующим мРНК из гена xirp2a , оценивали визуально под стереомикроскопом Olympus SZX-12, а изображения получали с помощью камеры QImaging Micropublisher 5.0 RTV. Границы дефектной сегментации оценивались по шкале ¹¹ с модификацией. Короче говоря, любая аномальная граница была определена как дефектная, и были собраны два измерения для каждой левой и правой стороны эмбриона: ALD, то есть положение первой дефектной границы, и FRS, то есть положение передней границы. первого исправного сегмента после отмывки ДАПТ через 9 с.Во всех подсчетах первые два сомита и сомиты позади 30-го были определены как исправные, поскольку первые два были зависимыми от сцепления, а самые задние сегменты были слишком малы для надежного анализа. Общее количество сегментов отсчитывали в 36–39 л.с. эмбрионы; эмбрионы до этой стадии имели более слабую картину окраски xirp2a . Скорость повторной синхронизации определяется как обратная мультипликативная граничная разница между вымыванием DAPT и FRS, то есть FRS минус 9.

BAC-рекомбинирование

Red / ET-рекомбинация была проведена, как опубликовано (дополнительный рисунок 1, верхняя панель) ^49,50,51 . Вкратце, рекомбинацию проводили на штамме E. coli HS996 , несущем плазмиду toolbox, pRed-flp4. pRed-flp4 имеет термочувствительный источник репликации, pSC101 , и содержит индуцируемую ангидротетрациклином Flippase ( Flp ) и оперон гомологичных рекомбиназ Redα , Redβ , Redγ и RecA , контролируется промотором, индуцируемым L-рамнозой.Кассета для мечения venus — с канамицином была создана с помощью ПЦР из плазмидной матрицы pR6K-venus, в которой ориджин R6K обеспечивает метку без фона, поскольку ее репликация не может происходить без специфического инициатора ⁵² .

Коммерчески доступный клон ВАС, охватывающий локус deltaD (ID: Ch2073-241D9), сначала был электропорирован в HS996 / pRed-flp4, затем подтвержден ПЦР колоний культивированных в течение ночи бактериальных колоний на твердой среде LB-агара с соответствующими антибиотики.Положительный клон HS996 / pRed-flp4 / deltaD -BAC культивировали в течение ночи в жидкой среде LB с антибиотиками, а затем 60 мкл насыщенной культуры переносили в 1,8 мл свежей среды при 30 ° C на шейкере Thermomixer ( Eppendorf), пока его OD600 не достигнет 0,2. Красную экспрессию индуцировали добавлением 30 мкл 25% L-рамнозы к жидкой культуре на 1 час при 37 ° C. После того, как OD600 достигнет 0,4, 500 нг кассеты для мечения электропорировали в HS996 / pRed-flp4 / deltaD -BAC, а затем культуру переносили в среду SOC без антибиотика на 1 час при 37 ° C.После повторного роста культуру центрифугировали и переносили в среду LB или чашку с LB-агаром с 10 мкг мл ^-1 канамицина для культивирования в течение ночи. Положительные клоны подвергали скринингу с помощью ПЦР колоний для области по стоп-кодону deltaD , и канамицин, фланкированный двумя сайтами FRT, затем удаляли индукцией Flp с 200 нМ ангидротетрациклина в среде.

Для субклонирования скелет вектора для рекомбинации был амплифицирован с помощью ПЦР из плазмидной матрицы pNPC2, которая представляет собой исходную плазмиду p15A, содержащую два сайта узнавания I-SceI, ген устойчивости ClonNAT и токсичный ген ccdB для уменьшения рекомбинационный фон.Плечи гомологии, нацеленные на 5′-выше или 3′-ниже по локусу deltaD , приводящие к фрагменту размером 14 т.п.н., были сконструированы для 5′-концов праймеров субклонирования. Рекомбинация аналогична описанной выше маркировке, за исключением того, что конечную культуру высевали на чашки с LB-агаром с 5 мкг мл ^-1 ClonNAT (WERNER BioAgents). Положительные клоны подвергали скринингу с помощью ПЦР колоний и плазмидную ДНК получали с использованием набора Qiagen Midi-Prep в соответствии с инструкциями производителя.Конечная конструкция, pNPC2- deltaD — venus , была проверена путем секвенирования области мечения и соединений скелета вектора с субклонированным фрагментом (средство секвенирования MPI-CBG). Список последовательностей праймеров и условий ПЦР можно найти в дополнительной таблице 2.

Микроинъекция и трансгенез, опосредованный I-SceI

Трансгенез мегануклеазой выполняли, как описано ранее (дополнительный рисунок 1, нижняя панель) ²³ . Короче говоря, инъекционные иглы вытаскивали при подготовке с 1.0 мм наружный диаметр Капилляры с внутренним диаметром 0,58 мм (Harvard Apparatus) с использованием съемника для микропипеток Flaming / Brown (Sutter Instruments) и мегануклеазу I-SceI (Roche) хранили при -80 ° C в виде аликвот по 2 мкл.

Стадийные эмбрионы от скрещивания aei / deltaD гомозиготных взрослых были помещены в форму для инъекций с 1,5% агарозой (Sigma) в 0,3-кратном буфере Дани и инъецированы на стадии одной клетки. 20 мкл инъекционной смеси готовили непосредственно перед инъекцией из 14 мкл pNPC2- deltaD — venus (100 нг мкл ^-1 ), 2 мкл буфера 10 × I-SceI, 2 мкл 50 мМ MgCl _{. 2} и 2 мкл I-SceI (10 Ед мкл ^-1 ).Для инъекции использовали пневматический насос Pico Pump PV 820 (World Precision Instruments). После загрузки инъекционной смеси в иглу с помощью наконечника микропогрузчика (Eppendorf) объем инъекции доводили до ~ 1 нл путем измерения диаметра болюса, введенного в каплю минерального масла (Sigma) на микрометре объектива. Инъекционную смесь вводили непосредственно в цитоплазму эмбрионов. После инъекции эмбрионы переносили в среду E3 и проверяли на положительную флуоресценцию Venus-YFP около 24 часов.ПФ. I-SceI-опосредованный мегануклеазой трансгенез известен своей высокой эффективностью трансгенеза и приводит к изменению числа копий трансгена при небольшом количестве вставок в геном ^53,54,55 . Потенциальные основатели были подвергнуты скринингу путем окрашивания экспрессии трансгена на ISH целиком и восстановления их фонового фенотипа aei ^{— / —} .

Экстракция геномной ДНК и количественная ПЦР в реальном времени

Геномная ДНК была извлечена либо из зажимов на плавниках взрослых особей, либо из двадцати пятидневных эмбрионов после оплодотворения с использованием набора DNeasy Blood & Tissue Kit (Qiagen, кат./ ID 69504) обработкой РНКазой А, как описано в инструкциях производителя. Затем концентрации экстрактов геномной ДНК измеряли с помощью Nanodrop 2000 (Thermo Scientific) и доводили до 6 нг мкл ^-1 . Количественная ПЦР в реальном времени была проведена с использованием системы Mx3000 Real-time PCR (Stratagene) со встроенным программным обеспечением для сбора / анализа. Для подготовки ПЦР две копии каждого образца загружали в 96-луночные планшеты с конечным объемом 10 мкл в каждой лунке, содержащей 5 мкл мастер-смеси 2 × SYBR Green (ThermoFisher Scientific), 30 нМ красителя без ROX (ThermoFisher Scientific ), 70 нМ пары праймеров и 3 мкл геномной ДНК.Программа ПЦР была 95 ° C 15 минут для инициации, 40 циклов 95 ° C 30 секунд, 60 ° C 30 секунд и 72 ° C 30 секунд, с последующим анализом диссоциации по умолчанию. Использовали семь пар праймеров, нацеленных на локус генома deltaD , локус генома deltaC или открытую рамку считывания venus (дополнительная таблица 3), и стандартную кривую и эффективность ПЦР каждой пары праймеров определяли серийным разведением WT. образцы.

Чтобы проанализировать образцы, мы сначала нормализовали необработанный Ct.значения от пар праймеров deltaC или deltaD до значений WT в группе в соответствии с эффективностью ПЦР каждой пары праймеров (дополнительная таблица 3). Затем относительные концентрации в каждой группе праймеров были разделены на усредненные концентрации deltaC для калибровки ошибки загрузки. В случае пар праймеров venus необработанный Ct. значения были нормализованы к одному назначенному трансгенному образцу. Таким образом, числа копий каждого образца были усреднены от относительных концентраций deltaD к образцам WT и, если применимо, от относительных концентраций venus друг к другу.Номера копий dover и damascus были получены в результате среднего по крайней мере трех независимых испытаний.

Иммуногистохимия и количественная оценка уровня белка

Дехорионированные эмбрионы фиксировали в 4% параформальдегиде / PBS для ISH. Для иммуногистохимии целого образца 9 эмбрионов на стадии сомита несколько раз промывали PBS / 0,1% Tween и затем повышали проницаемость путем промывания PBS / 0,2% Triton X-100 в течение 30 минут при комнатной температуре (RT). Блокирующий раствор (Roche) готовили в PBS / 0.2% Triton X-100 использовали для блокирования при комнатной температуре в течение 2 часов, затем эмбрионы инкубировали с 1: 100 PBS / 0,2% Triton X-100, разведенным мышиным моноклональным антителом против DeltaD (Abcam) при 4 ° C в течение ночи. После инкубации первичных антител эмбрионы промывали PBS / 0,2% Triton X-100 четыре раза в течение 30 мин, затем инкубировали с разведенным 1: 200 PBS / 0,2% Triton X-100 козьим антимышиным IgG, конъюгированным с Alexa Fluor 488 (Invitrogen ) в течение 2 ч при КТ. Вторичные антитела промывали PBS / 0,2% Triton X-100 по крайней мере четыре раза в течение 30 минут при комнатной температуре.После окрашивания образцы постепенно переносили в 87% глицерин / 13% PBS и выдерживали при 4 ° C в течение ночи перед установкой на плоскую поверхность. Реагент ProLong Gold Antifade Reagent (Invirogen) использовался в качестве закрепляющего реагента.

Для сравнения генотипов эмбрионы окрашивали параллельно в каждом эксперименте. Изображения PSM плоских образцов были получены с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа Zeiss LSM 510 META. Конфигурации сбора данных были идентичны для всех образцов. Средняя интенсивность флуоресценции PSM была получена из z -проекции трех неперекрывающихся z -секций с интервалами 15 мкм, и средний участок был выровнен по центру хорды.Относительные уровни DeltaD в задней части PSM представляли собой средние значения интенсивности, полученные для круглых областей диаметром 68 мкм.

Покадровая визуализация и анализ

Период сомитогенеза определяли с помощью покадровой микроскопии нескольких эмбрионов, как описано ранее ^56,57 . Короче говоря, 20–25-стадийные эмбрионы были извлечены из пинцета с помощью щипцов непосредственно перед визуализацией. Дехорионированные эмбрионы осторожно выравнивали латерально по форме, приготовленной из 2% агарозы с низкой температурой плавления (Sigma-Aldrich) на чашке для клеточных культур со стеклянным дном (CELLview).Чтобы предотвратить перемещение эмбрионов во время визуализации, для анестезии использовали забуференный трикаин (этил-3-аминобензоат метансульфоновая кислота) (Sigma-Aldrich) в конечной концентрации 0,016% в среде E3. Покадровые изображения получали с помощью инвертированного микроскопа Zeiss Axiovert 200M с камерой Andor iXOn 888 EM-CCD и программно управляемым моторным столиком. Температуру во время получения изображения контролировали с помощью модуля теплового охлаждения Warner TCM-1 (Warner Instruments) и регистрировали во время съемки с помощью электротермометра Voltcraft Plus K202.Визуализация начиналась на стадии бутона (10 л.с.с) и длилась 16,5 ч; получение и постобработка изображений были выполнены с использованием программного обеспечения Andor IQ2.0. Для лечения DAPT эмбрионы на 4 л.с. переносили в 50 мкМ DAPT или DMSO control в среде E3. Для визуализации использовались четырехкамерные чашки со стеклянным дном, содержащие WT или трансгенные эмбрионы с или без DAPT.

Для расчета периода сомитогенеза время появления сомитной борозды в стволе оценивалось у каждого эмбриона по покадровой видеозаписи для сегментов 4–19.Наклон линейной регрессии от момента времени к количеству сомитов рассчитывали с помощью Microsoft Excel. Период сомитогенеза — это наклон, умноженный на временной интервал покадровой видеозаписи. Период сомитогенеза каждого генотипа был получен по крайней мере в трех независимых испытаниях при одинаковых температурных условиях.

Измерение удлинения оси и укорочения PSM было выполнено, как ранее опубликовано ^2,18,39 . Вкратце, в собранном выше покадровом видеоролике измерения проводились в каждом соответствующем временном интервале с использованием инструмента сегментированной линии на Фиджи.Эта линия проходила от заднего кончика хвостовой почки либо до переднего конца головы, либо до самой недавно сформированной границы сомита, соответственно, и следовала по ходу хорды. В настоящем исследовании время 0 было определено как 5 сомитных стадий.

Измерение передней длины волны от

her1 целиком ISH

В общей сложности от 4 до 20 эмбрионов на стадии сомита были окрашены рибозондом her1 в соответствии с опубликованным протоколом ISH ⁵⁸ и отображены латерально на Olympus SZX- 10 стереомикроскоп с QImaging Micropublisher 5.0 RTV камера. Изображения в формате TIFF были преобразованы в изображения с инвертированной шкалой серого из красного канала для получения более высокого отношения сигнал / шум, чем исходные изображения RGB.

Для измерения распределения интенсивности вдоль оси были проведены линии сегментов шириной 35 пикселей (36,6 мкм) от передней до самой передней полосы her1 до конца PSM (рис. 3a, верхняя левая панель). Передние длины волн рассчитывались по интервалам между первыми двумя пиками (рис. 3а). Передняя граница первого пика, X ₀ , определяется пересечением линии фона с линией линейной регрессии с наивысшим значением r ² , начиная с точки перегиба передней стороны пика. пик, идущий кпереди по изгибу пика. her1 длина выражения, her1 -L, длина в пикселях от X ₀ до конца измерения строки.

Измерение плотности клеток / площадей в

островке1 целиком ISH

Четыре эмбриона на стадии сомита были гибридизированы с рибозондом islet1 и отображены, как описано выше. Изображения в формате TIFF были скорректированы с помощью автоконтрастности в Adobe Photoshop CS4 и преобразованы в изображения в градациях серого из красного канала.

Для измерения плотности ячеек PMN и RB мы использовали подключаемый модуль Peak Finder (Johannes Schindelin, неопубликовано) на Фиджи ⁵⁹ . Вдоль PMN или RB по передней оси (рис. 4a, нижняя правая панель) мы нарисовали линию шириной 5 пикселей (3,78 мкм) и длиной 228,1 ± 40,2 мкм (PMN) или 233,9 ± 40,4 мкм (RB), затем проанализировали количество пиков интенсивности пикселей вдоль этой линии с помощью средства поиска пиков. Для измерения областей TG монохромные растровые изображения были сгенерированы путем разделения изображений с использованием Adobe Photoshop CS4 с различными уровнями, чтобы соответствовать черным областям, напоминающим области TG.Таким образом, области TG были получены из числа черных пикселей.

Расчет периода сегментации по передней длине волны

В Damascus передняя длина волны короче, чем в WT, что, как мы ожидаем, повлияет на частотный вклад эффекта Доплера (дополнительное примечание 1). Здесь мы проверили, как этот измененный доплеровский вклад связан с наблюдаемой разницей в скорости сегментации между WT и Damascus . В качестве эталона для относительного вклада эффекта Доплера в общую скорость сегментации мы использовали измерения на живом репортере Looping ² .Исходя из этого, мы подсчитали, что на эффект Доплера приходится 22% наблюдаемой скорости сегментации (дополнительное примечание 2). Скорость сегментации в WT при 28,5 ° C составляет, где T — период сегментации, который дал ожидаемый доплеровский вклад D = 22% · R = 0,0089 ± 0,0002, минимум ^-1 . Используя тот факт, что скорость укорачивания ткани одинакова в WT и Damascus , и принимая во внимание влияние измененной длины волны на доплеровский вклад, мы ожидаем в Damascus доплеровский вклад

, где λ — это доплеровский вклад. передняя длина волны в WT и передняя длина волны в Damascus (дополнительный текст 1).Для случая, когда измененный доплеровский вклад является единственным изменением в волновой картине, влияющим на скорость сегментации, мы получили оценку скорости сегментации в Дамаске as, а период сегментации выглядит следующим образом. Измеренная относительная длина волны, предполагаемый доплеровский вклад и результирующий период сегментации в каждую из временных точек, измеренных на рис. 3b, приведены в дополнительной таблице 1.

Иллюстрация влияния связи на волновую картину

Мы использовали теорию связанных генераторов, который учитывает задержки связи, чтобы продемонстрировать, как длина волны результирующего волнового рисунка зависит от связи (дополнительное примечание 3).Мы описали волновую картину в PSM одномерным фазовым полем вдоль удлиненной оси тела в системе отсчета, движущейся вместе с кончиком хвостовой почки (дополнительный рис. 4a). В этой системе отсчета клетки перемещаются в переднем направлении, чтобы стать частью сформированных сегментов, представленных фиксированной волновой картиной. Волновые паттерны возникают из частотно-зависимого профиля вдоль оси тела с максимальной частотой на кончике хвостовой почки, а колебания постепенно замедляются по мере приближения клеток к переднему концу (дополнительный рис.4б). При постоянной длине ФСМ эта система достигает состояния с периодической во времени волновой картиной. Не зависящий от времени фазовый профиль описывает пространственное распределение волн вдоль PSM (дополнительный рис. 4c – f). Волновую картину можно охарактеризовать своей локальной длиной волны и общим количеством волн в PSM. Здесь мы сосредоточились на длине волны на переднем конце, которая экспериментально оценивается в этом исследовании (рис. 3b; дополнительный рис. 2). Не все решения для волновых картин были устойчивыми к небольшим возмущениям фазового поля.В определенных областях параметров небольшие возмущения нарастают экспоненциально и не позволяют системе сформировать устойчивую волновую картину. Мы выполнили линейный анализ устойчивости, который выявил области, в которых модель является стабильной (дополнительное примечание 3). В определенных областях параметров система показала несколько решений для заданного набора параметров. Однако здесь мы рассмотрели только области параметров, которые позволяют получить одно стабильное решение, которое соответствует надежной системе формирования паттернов (дополнительный рис.5А). В областях со стабильными волновыми структурами мы смоделировали систему численно и охарактеризовали полученные волновые структуры по их длине волны и количеству волн (дополнительный рисунок 5). Изменения силы и задержки связи привели к множеству различных длин волн и количества волн в PSM (дополнительные рисунки 4C – F и 5C, D).

Статистика

Значения представлены как среднее ± стандартное отклонение. если не указано иное. Тест Стьюдента t с параметрами двусторонней и неравной дисперсии был выполнен в Microsoft Excel.

Доступность данных

Данные, подтверждающие выводы этого исследования, можно получить у соответствующего автора по запросу.

Страница не найдена | Издательство Йельского университета

— Любой -Искусство и архитектура-Галерея американского искусства Аддисон-Афро-афро-американец-Америка-Древняя архитектура-Художественный институт Чикаго-Азия и Юго-Восточная Азия-Центр выпускников Бардов-Библиотека редких книг и рукописей Бейнеке-Британские-Карикатуры и Графическое искусство-Каталоги Raisonné и Reference-Центральная и Восточная Европа-Институт искусства Кларка-Кливлендский музей искусства-Сохранение и технические исследования-Современное искусство (после 1960 г.) -Далласский музей художественно-декоративного искусства, ювелирных изделий и текстиля-Дизайн и графика Дизайн-Детройтский институт искусств-Мода и история костюма-Французский генеральный-Гарвардские художественные музеи-Ирландское-итальянское-Японское общество-Еврейский музей-Художественный музей Кимбелла-Латинская Америка-Средневековье-Коллекция Менил-Меркаторфондс-Музей искусств Метрополитен-Мидл и Ближневосточный современный музей изящных искусств, Хьюстон-музейные исследования-Национальная художественная галерея, Д.C.-Национальная художественная галерея, Вашингтонская национальная галерея, Лондон-Национальная галерея, Вашингтон — Исследования по истории искусства — Нидерланды и Голландия — Oceanic — Центр Пола Меллона — История искусства Пеликана — Путеводители по архитектуре Певснера — Художественный музей Филадельфии -Коллекция Филлипса-Фотография-Доколумбовый и индейский музей-Художественный музей Принстонского университета-Рейксмузеум Амстердам-Скандинавский-испанский-Городская история и ландшафтные исследования-Музей изящных искусств Вирджинии-Художественный музей Уодсворта Атенеум-Музей американского искусства Уитни-Йельский центр Художественная галерея Британского художественного Йельского университетаБиография-Автобиография-Общие-Письма-МемуарыБизнес-Бизнес-История бизнесаКлассика-Общие-Экономика-Экономическая история-Финансы-Общие-Общие-Общие-Здоровье и Медицина-Здоровье потребителей-Общая-История-Медицина-Иммунология-Нейробиология-История-Афроамериканские исследования -Африканские исследования-американская история-американистика-древняя история-азиатские исследования-атлантическая история-британские исследования-культурная история-восемнадцатый век y Исследования-История окружающей среды-Европейская история-Французские исследования-Общие-германские исследования-История медицины-Исследования Холокоста-Разведка и шпионаж-Международные исследования-Ирландские исследования-Исламоведение-Итальянские исследования-Еврейская история-Журналистика-Латиноамериканские исследования-Морское дело История-Средневековье-Средневековье / Исследования Возрождения-Исследования Ближнего Востока-Военные исследования-Исследования коренных американцев-Исследования Ближнего Востока-Новая Англия-Нью-Йорк-Популярная культура-Возрождение-Рабство-Славянские исследования-Южные исследования-Испанские исследования-Викторианские исследования-Вестерн Исследования-Женские Исследования-Всемирная история Язык-Арабский-Библейский иврит-Камбоджийский-Китайский-Французский-Немецкий-Греческий-Хауса-Иврит-Игбо-Ирландский-Итальянский-Японский-Кхмерский-Курдский-Латинский-Методы-Другой-Персидский-Польский-Португальский -Русский-испанский-урду-вьетнамский-идиш-йоруба-закон-конституционное право-этика-общая-юридическая история-литературные исследования-книги о книгах-культурная критика-драма-эссе-художественная литература-литературная критика-литература-поэзия-исполнительское искусство-танец-фильм Исследования-G eneral-джаз, музыка, опера, театр, философия, этика, общая риторика, политология, американская политика, сравнительная политика, текущие события, евразийские исследования, европейская политика, общая политика, общая политика, международные отношения, исламские исследования, политические исследования, политическая философия, политическая Теория Психология-Развитие ребенка-Общий-Психоанализ-Психология старения Справка-Общие справочные-Библиотечные исследования-Путешествия Религия-Библейские исследования-Буддизм-Христианство-Сравнительная религия-Этика-Общий-Индуизм-История религии-Исламоведение-Иудаистика-Религиозная мысль- Даосизм, наука, астрономия, когнитивные науки, компьютерные исследования, электронная инженерия, исследования окружающей среды, эволюция, география, геология, история науки, ландшафтные исследования, науки о жизни, морские науки, океанография, математика, естественная история, орнитология, физические науки, науки о растениях / Садоводство-Общественное здравоохранение-Технологии-Web / Интернет-Зоология Социальные науки-Антропология-Археология-Криминология-Образование-Этнические исследования-Исследования в области питания -Изучение геев и лесбиянок-гендерные исследования-трудовые исследования-лингвистика-социальная работа-социология-спорт-городские исследования

.