Вторник, 5 марта

Всаа 2 1 1 порошок как принимать: Аминокислоты | БЦАА | BCAA 2:1:1

BCAA – как правильно принимать, оптимальные дозировки и наилучшее время для приема.


Общеизвестно, что аминокислоты служат строительным материалом для организма. Мы употребляем их в пищу и управляем с их помощью биохимическими процессами, но не все аминокислоты организм способен синтезировать. Такие вещества называются незаменимыми и поступают только с пищей или специальными добавками. Напрямую влияют на развитие мускулатуры три незаменимых аминокислоты: лейцин, изолейцин и валин. За разветвлённую структуру их назвали Branched-chain Amino Acids. Разберём подробнее, зачем они нужны и как приём БЦАА влияет на тренировочный процесс.


Что мы получаем, когда пьём Бцаа?


  • Лейцин — стимулирует рост мышц и ускоряет расщепление жировых отложений. Он способен усиливать анаболическое действие остальных аминокислот, поэтому считается эффективной добавкой к сывороточным коктейлям. Важно принимать bcaa правильно и учитывать, как протекают процессы катаболизма в течение дня. Тогда значительно сократится время мышечного восстановления, что позволит улучшить спортивные результаты.


  • Валин — участвует в заживлении микроразрывов мышц после тренировки. Следовательно, процесс регенерации протекает эффективнее, а мышечная ткань растёт быстрее. Аминокислота участвует в сохранении азотистого баланса, что ускоряет все биохимические реакции.


  • Изолейцин — повышает общую выносливость, так как стимулирует синтез гемоглобина. Обладает общим тонизирующим эффектом, нормализует обмен веществ и не даёт разрушаться мышечным волокнам.

Как правильно принимать bcaa: рассчитываем дозировку и время

Как принимается БЦАА в дни тренировок


Интенсивная мышечная работа требует энергии. В качестве её источника организм использует гликоген — запас сахаров из пищи. Это доступная энергия, но она быстро заканчивается. И тогда начинается распад мышечной ткани: белки расщепляются до аминокислот, которые тут же сжигаются. Как следует принимать БЦАА, чтобы катаболические процессы обратить в анаболические?


Препарат принимается перед тренировкой и сразу после неё. BCAA мгновенно всасываются в кровь и попадают к мышцам, сывороточному белку для этого понадобится гораздо больше времени. Так как питательная среда уже есть, организм и не думает расщеплять собственные ткани. Плюс улучшается питание и кровообращение в мышцах.

Как пить Бцаа в дни отдыха


Катаболические реакции действуют даже во время отдыха мышц. Особенно активны они с утра, во время пробуждения. Если не хотите терять даже малую часть результата, над которым работали вчера в спортзале — не забывайте про утренний приём BCAA. Треть от обычной дозы даст мышечным волокнам питательные вещества и энергию, поможет быстрее восстановиться после интенсивных нагрузок.

Формы препаратов BCAA


  • Самый экономичный способ — принимать bcaa в порошке. Как это лучше сделать? Порцию BCAA смешиваете с водой, согласно указаниям на этикетке продукта. У порошковых смесей иногда горький вкус и они плохо растворяются. Другой вариант – съешьте требуемую дозу с ложки и запейте большим количеством воды. Сейчас выпускают порошки с вкусовыми добавками, можно поэкспериментировать и найти оптимальный для себя способ употребления.


  • Дороже, но удобнее — bcaa в капсулах. Как их принимать и насколько удобнее носить с собой — вопросов не возникает. Нейтральный вкус является важным достоинством, но одной упаковки хватает ненадолго (в сравнении с bcaa в порошке).


  • Bcaa выпускаются также в таблетках и жевательных формах, представляют собой прессованный порошок. Как и bcaa в капсулах, таблетки удобны в использовании, но усваиваются дольше.


  • Жидкие Бца усваиваются чуть быстрее, чем растворенный порошок. Их плюсом является то, что они не требуют приготовления.


Каждый сам для себя решает, стоит ли пить БЦАА. При сбалансированной диете можно получить те же аминокислоты из пищи. Но питаться правильно не всегда удаётся, а во время интенсивной тренировки мышцам не поможет плотный обед. Только готовая смесь быстро поступает к мышечным волокнам и предотвращает их катаболизм.

ALLMAX Nutrition, BCAA, быстрорастворимый продукт, соотношение 2:1:1, неароматизированный порошок, 400 г

  • Наука — Инновации — Качество — Результаты
  • Добавки профессионального уровня
  • Порошок, инстанизированный для легкого смешивания
  • Увеличивает мышечную массу†
  • Уменьшает мышечные потери †
  • Уменьшает боли в мышцах †
  • Диетическая добавка
  • 100% гарантия качества и эффективности
  • Не содержит глютена
  • Каждый ингредиент и партия проверяются в лабораторных условиях
  • Предприятие зарегистрировано в cGMP — организации, контролирующей условия производства
  • Без сои

Порошок аминокислот с разветвленной цепью AllMax, инстанизированный в соотношении 2:1:1

AllMax содержит порошок аминокислот с разветвленной цепью (BCAA) в соотношении 2:1:1. В отличие от других аминокислот, BCAA уникальны тем, что они поглощаются мышцами напрямую, тогда как другие аминокислоты обрабатываются печенью. Аминокислоты с разветвленной цепью незаменимы для быстрого построения мышечной массы. Широко известно, что аминокислоты с разветвленной цепью увеличивают скорость роста мышц в качестве реакции на тренировки; на самом деле исследования показывают, что до 35% мышечной ткани состоит из аминокислот с разветвленной цепью. Аминокислоты с разветвленной цепью весьма антикатаболичны. Ввиду того, что аминокислоты с разветвленной цепью поглощаются мышечной тканью напрямую, ваши мышцы обеспечены топливом, и это сильно препятствует их разрушению. Для конкурентоспособных спортсменов, которые стремятся к увеличению силы и объемов мышц, ВСАА является неотъемлемым приложением.†

L-лейцин — обеспечивает поддержку мышечной ткани и обеспечивает энергию, особенно при интенсивных тренировках, и помогает поддерживать положительный баланс азота в организме. Лейцин относится к «ограничивающим питательным веществам»; это означает, что для ассимиляции белка в организме, L-лейцин необходим в определенном соотношении с другими аминокислотами. Лейцин активирует основной воздействующий на обменные процессы путь, называемый mTOR, который стимулирует синтез белка в мышцах. †

L-валин- играет роль в метаболизме глюкозы, синтезе белка и обеспечивает иммунную поддержку. Он обеспечивает дополнительную глюкозу для энергии во время тяжелых тренировок, что делает его ценным дополнением для любого спортсмена. Он также участвует в детоксикации избытка азота в печени.

L-изолейцин— обеспечивает восстановление мышц после тренировки и, как было установлено, помогает поддерживать уровень сахара в крови уже в пределах нормы. Изолейцин играет важную роль в образовании гемоглобина и может повысить уровень энергии и продлить выносливость.

Аминокислоты с разветвленной цепью AllMax 2: 1: 1 — это самые высококачественные аминокислоты с разветвленной цепью, которые можно купить.

† В сочетании с диетой и тренировками выносливости.

BCAA PRO Powder 250g PINEAPPLE

Аминокислотный комплекс BCAA Pro Powder от GeneticLab поможет вам эффективнее восстанавливаться после напряженных тренировок, повысит силовые показатели и, конечно же, поддержит рост мышечной массы. И все за счет удачно подобранных компонентов.
Основу его составляют BCAA (аминокислоты с разветвленными боковыми цепями) в пропорции 4:1:1. Данные аминокислоты напрямую стимулируют белковый синтез и предупреждают развитие катаболизма. Они также могут расходоваться на топливо.
Дополняет формулу комплекса специальная аминокислотная смесь (AAKG, таурин и глицин), обеспечивая тем самым успокаивающее, а также нейропротекторное действие за счет снижения вредного воздействия избыточного глутамата, повышает физическую выносливость.

GeneticLab BCAA Pro Powder дополнительно обогащен глютамином, обладающим сильными антикатаболическими свойствами. Эта аминокислота помогает предотвратить синдром перетренированности и создать красивый мышечный рельеф, способствует сохранению запасов протеина, что актуально при постоянных тренировках. Употребление добавок с глютамином сразу после тренировки помогает в кратчайшие сроки восстановить организм, защититься от инфекций, уменьшить риск мышечных болей. Делая ставку на данный аминокислотный комплекс, вы станете выносливее, улучшите обменные процессы в своем теле, обезопасите мышцы от катаболизма и поможете своему организму быстрее избавляться от жира.

 

Особенности состава и для чего нужен BCAA Pro Powder от GeneticLab?

С каждой его порцией вы получите BCAA – аминокислоты, которые играют ключевую роль в мышечном росте. Причем не только из-за того, что они составляют третью часть от всех аминокислот в мышцах. BCAA быстрее остальных аминокислот достигают мышц, всасываясь из крови сразу в мышечную ткань. Поэтому, делая на них ставку, вы организуете мгновенную подпитку мышц аминокислотами для поддержания оптимального мышечного роста и восстановления. В составе BCAA Pro Powder данные аминокислоты находятся в соотношении 4:1:1. Порция лейцина в 4 раза выше, чем изолейцина и валина, что очень выгодно для организма с точки зрения организации белкового синтеза. Ведь именно лейцин играет ключевую роль в белковом синтезе. Он связан с анаболическим агентом mTOR, который ускоряет синтез белка при повышенном уровне лейцина в крови. Чем больше лейцина в организме, тем быстрее идет синтез белка и тем быстрее растут мышцы.
BCAA полезны тем, что не дают развиваться катаболическим процессам в мышцах. Они также при необходимости могут растрачиваться на энергетические потребности организма. Во время сушки или диеты, когда приходится урезать количество потребляемых углеводов,  данное свойство BCAA оказывается очень кстати. В условиях тренировочного процесса BCAA помогают в борьбе с усталостью, препятствуя проникновению триптофана в мозг. Чем меньше триптофана в мозге, тем меньше будет произведено серотонина, который дает сигнал в мозг о том, что организм устал.

 

Что даст применение GeneticLab BCAA Pro Powder?

GeneticLab BCAA Pro Powder —  это продвинутая формула BCAA плюс глютамин, а также 5 аминокислот для синергизма воздействия. BCAA PRO помогают обеспечить как потерю жира, так и набор сухой мышечной массы. Вы увеличите интенсивность тренировки и достигните оптимального мышечного синтеза белка и восстановления.

 

Эффекты от приема GeneticLab BCAA Pro Powder:

  • Субстрат для выработки энергии и производства мышечного протеина.
  •  Предотвращение катаболических процессов.
  •  Увеличение мышечной массы.
  •  Прирост силовых показателей.
  •  Создание условий для производства организмом других аминокислот.
  •  Метаболическая модуляция.
  •  Стимуляция выработки инсулина.
  •  Редукция жировых отложений за счет экспрессии лептина в адепоцитах.
  •  Увеличение эффективности приема спортивного питания.

GeneticLab BCAA Pro Powder позволит вам получить максимальную отдачу от тренировок, проводить сессии чаще и интенсивнее. Приобретение аминокислот – шаг на пути к здоровью и хорошей физической форме.

ВСАА 2-1-1 порошок на развес WIRUD (германия) (аминокислоты, BCAA, бцаа, спортивное питание) без вкуса 0,5кг

=========================================

МИНИ-АУКЦИОН СПОРТИВНОЕ ПИТАНИЕ

Телефон для справок +79632581777, 224-85-95

Самовывоз ул. Комарова 6 с 10.00 до 20.00

Бесплатная доставка по городу от 2000руб

=========================================

Цена за 0.5кг

Главные доказанные эффекты BCAA аминокислот в бодибилдинге:

+Предохранение мышц от разрушения

+Увеличение сухой мышечной массы

+Снижение процента жира в организме

+Увеличение силовых показателей

Роль BCAA в организме:

+Субстрат для синтеза мышечного белка

+Субстрат для продукции энергии

+Прекурсоры для синтеза других аминокислот, особенно аланина и глютамина

+Метаболические модуляторы

+BCAA стимулируют синтез мышечного протеина за счет активации PI3K

+Стимулируют синтез мышечного протеина за счет активации mTOR

+Подавляют катаболизм и разрушение мышц

+Стимулируют выработку анаболического гормона — инсулина

+Сжигают жир за счет экспрессии лептина в адипоцитах посредством mTOR

Отсюда видно, что BCAA выполняют сразу несколько полезных функций и могут применяться с большим успехом при наборе мышечной массы, при похудении, работе на рельеф, аэробных тренировках.

Когда употреблять ВСАА

Наиболее подходящее время для приема BCAA — перед, во время и сразу после тренировки. Лучше всего готовить энергетический напиток, растворяя порцию аминокислот и несколько ложек сахара в воде. Это обеспечит постоянное поступление жидкости, углеводов и аминокислот в кровь во время всей тренировки. Также можно принимать порцию аминокислот сразу после сна для подавления утреннего катаболизма.

Сколько принимать BCAA

Оптимальная разовая доза BCAA составляет 4-8 граммов, как при похудении, так и при наборе мышечной массы. Кратность приема 1-3 раза в сутки. Меньшие дозы BCAA тоже эффективны, однако они уже не будут полностью покрывать потребности организма. Многие производители хитрят, и выпускают BCAA в небольших дозах, хотя цена остается высокой, поэтому всегда смотрите на задней стороне упаковки количество порций и размер одной дозы BCAA. Продолжительность приема BCAA не ограничена, перерывы и циклирование не требуются.

Дозировка ВСАА указывается без учета их содержания в протеиновых добавках и продуктах (любой белок содержит эти аминокислоты, однако обсуждается аспект именно дополнительного приема, при условии получения достаточного количество протеина в сутки).

12 лучших BCAA — Рейтинг 2019 года (Топ 12)

Одна из ключевых ролей в спортивном питании отводится аминокислотам. А среди них наибольшей популярностью у представителей силовых видов спорта и фитнеса традиционно пользуются комплексы BCAA. Главное же подтверждение эффективности последних – это многочисленные положительные отзывы спортсменов и достигнутые ими результаты. Лучшие (по отзывам спортсменов и экспертов) BCAA — в нашем рейтинге.

Что такое BCAA и для чего они нужны?

BCAA – это уникальный комплекс из трёх незаменимых аминокислот с разветвлённой структурой боковых цепей, а конкретно лейцина, изолейцина и валина. Именно они выступают в роли строительного материала для мышечных тканей и из них состоят мышцы человека более чем на 30%. Сам термин «незаменимые» означает, что организм самостоятельно не способен синтезировать эти вещества и может получать их только с пищей.

Какими полезными свойствами обладают BCAA:

  • Предотвращают разрушение мышц (катаболизм) при интенсивных физических нагрузках;
  • Стимулируют и обеспечивают мышечный рост;
  • Облегчают восстановление;
  • Обеспечивают организм энергией, повышают выносливость;
  • Способствуют улучшению силовых показателей;
  • Помогают бороться с жировыми отложениями;
  • Усиливают эффект от применения других спортивных добавок.

Виды BCAA и варианты форм выпуска

Под аббревиатурой BCAA на упаковке могут скрываться либо сами аминокислоты с разветвлённой структурой боковых цепей, либо комплекс на их основе с добавлением других вспомогательных компонентов.

Другое частое отличие добавок BCAA – это разное соотношение в них лейцина, изолейцина и валина. Классический вариант 2:1:1, но встречаются 4:1:1, 6:1:1, 8:1:1 и даже больше. Какие BCAA лучше выбрать? Однозначного ответа не существует. Здесь всё сугубо индивидуально. Многие опытные спортсмены считают, что лучше «классика», а повышение концентрации очень эффективного, но не особо дорогого лейцина, позволяет производителям при невысокой себестоимости добавки максимально поднять на неё цену.

Формы выпуска уже привычны для спортивного питания:

  • Порошок;
  • Таблетки;
  • Капсулы;
  • Жидкость.

В плане скорости усвоения разницы никакой. Большее значение имеют цена и удобство применения. Самый популярный вариант – порошок. Он дешевле и в нём обычно выше концентрация BCAA на порцию. Капсулы и таблетки дороже, но удобнее в приёме. Жидкая форма мало популярна из-за высокой цены без каких-либо преимуществ в эффективности.

В заключение, важно отметить, что в обзоре, конечно, представлены не все достойные разновидности BCAA. Их гораздо больше. А также не включены некоторые известные и широко разрекламированные комплексы, которые являются скорее коммерческими проектами и, несмотря на немалую цену, имеют неоправданно низкую концентрацию активных веществ. Что касается оптимального выбора, есть смысл протестировать несколько вариантов. И остановиться на том, который для вашего организма будет наиболее эффективен.

Внимание!
Имеются противопоказания, необходима консультация специалиста

BCAA 5000 Powder от Optimum Nutrition (bcaa)

Каждая порция BCAA 5000 Powder от Optimum Nutrition снабжает вас 5000 мг. (5 гр.) смеси из аминокислот с разветвленными цепями (L-валин, L-лейцин, L-изолейцин). Аминокислоты с разветвленными цепями (Branched Chain Amino Acids — BCAAs), так названы из-за их разветвленной химической структуры, эти аминокислоты являются незаменимыми и организм не может их синтезировать самостоятельно. Метод, с помощью которого делают BCAA от Optimum Nutrition позволяет порошку размешиваться в воде или соке полностью, не оставляя комочков или осадка. В результате, трудности которые вы испытывали при размешивании BCAA других производителей, остались в прошлом.

Основное:

— Первая формула BCAA специально обработанных для лучшего размешивания и усвоения

— Легко размешиваются обычной ложкой

— Лейцин, изолейцин и валин в оптимальной пропорции 2:1:1

— Высоко концентрированные

— Поддерживают строительство мышц и восстановление

Купить БЦА 5000 Паудэр вы можете в магазине спортивного питания BodyBuildingRussia.com.

Состав BCAA 5000 Powder, состав питательных веществ в одной порции (2 мерные ложки — 9,5 гр.) продукта**:

  • Калории — 10
  • Всего углеводов — 3 гр.
  • Микронизированный L-лейцин — 2,5 гр.
  • Микронизированный L-изолейцин — 1,25 гр.
  • Микронизированный L-валин — 1,25 гр.

Другие ингредиенты**: натуральные и искусственные ароматизаторы, лимонная кислота, инулин, лецитин, сукралоза, винная кислота, диоксид кремния, FD&C Red #40. Содержит сою (лецитин).

Как принимать BCAA 5000 Powder, рекомендации по применению: добавьте две мерные ложки BCAA 5000 Powder в 300-360 мл. воды или вашего любимого напитка, размешайте в течение 10-20 секунд. Принимайте между приемами пищи, за 30-45 минут до тренировки и/или сразу после тренировки. Не превышайте рекомендуемую дозировку. Продукт не должен использоваться, как замена полноценного питания. Прекратите прием продукта, если почувствуете отклонения от нормального состояния здоровья.

Порций в упаковке: 380 грамм — 40 порций.

Противопоказания: индивидуальная непереносимость компонентов продукта, беременным и кормящим женщинам, лицам до 18 лет. Перед применением проконсультироваться с врачом.

Примечание: не является лекарством.

Условия хранения: хранить вдали от прямого попадания солнечных лучей, в сухом, прохладном месте, недоступном для детей.

Срок годности: смотреть на упаковке.

Изготовитель: Optimum Nutrition, Inc. Attn: Consumer Affairs Dept. 700 N. Commerce Street, Aurora, IL 60504, USA.

 

* описание предоставлено производителем продукта.

** состав питательных веществ и ингредиентов, а также вес одной порции и вес самого продукта может незначительно меняться в зависимости от вкуса продукта.

BCAA Как Принимать | Megapit.kz

Мы уже говорили о том, что аминокислоты BCAA – это три незаменимые аминокислоты (лейцин, изолейцин, валин), которые непосредственно участвуют в процессе строения мышечной массы. Спортивные добавки BCAA практически безвредны для человеческого организма и сочетаются с другими видами спортпита. Однако нельзя забывать, что человеку необходимо разное количество аминокислот в дни тренировок и дни отдыха.


Содержание:

Как принимать BCAA ? Основные принципы приема BCAA !

Есть 20 незаменимых аминокислот, которые необходимы для каждого биохимического процесса в организме человека. 9 из этих 20 аминокислот считаются незаменимыми. Незаменимые аминокислоты не могут вырабатываться человеческим организмом, поэтому мы должны получать их с пищей. Среди них три аминокислоты, называемые аминокислотами с разветвленной цепью (BCAA):

  1. Лейцин.
  2. Изолейцин.
  3. Валин.

В то время как другие незаменимые аминокислоты в основном используются для создания биологически активных молекул (гормонов), BCAA являются строительными блоками тканей тела (мышц и органов).

Лейцин — «звезда» трио, так как он напрямую стимулирует синтез мышечного белка. Изолейцин играет важную роль в регулировании выработки сахара и гемоглобина в крови. Валин поддерживает азотный баланс и стимулирует рост и восстановление мышечной ткани.

Вы найдете эти аминокислоты в основном в красном мясе, яйцах и молочных продуктах. Хотя BCAA содержатся во многих продуктах с высоким содержанием белка, определенно есть преимущества в добавлении к ним пищевых добавок.

Какая польза от приема BCAA?

  1. Они поддерживают и усиливают синтез мышечной ткани за счет так называемого «инсулогенного эффекта», повышая уровень анаболического гормона инсулина.
  2. Уменьшат распад мышечного белка (так называемый катаболизм) во время режимов похудания, поддерживая мышечную массу.
  3. Увеличат время восстановления микроразрывов мышечных волокон в результате интенсивных тренировок. Это особенно важно для профессиональных спортсменов, которые следят за режимами с большим объемом тренировок.
  4. Они могут быть преобразованы в другие аминокислоты, такие как аланин и глутамин.
  5. Придают ощущение бодрости и повышают концентрацию внимания.

Когда необходимо принимать BCAA?

Прием BCAA может принести вам пользу в следующих двух случаях:

  1. Если ваша цель — сжечь жир, но в то же время вы хотите сохранить мышечную массу.
  2. Если вы стремитесь увеличить мышечную массу. Прием BCAA значительно улучшит ваше восстановление, что позволит увеличить объем тренировок.

Какая оптимальная суточная доза?

На суточную дозу BCAA влияют многие факторы, такие как ваша цель, масса тела, возраст, пол, опыт. Начните с дозы около 4-8 граммов в день, а затем корректируйте дозу в зависимости от того, что дает вам наилучшие результаты.

Какая форма лучшая?

BCAA продается в двух формах: таблетки/капсулы и порошок. Если мы проведем между ними сравнение, мы не найдем большой разницы в их эффективности. Но все таки есть свои особенности в приеме определенных форм BCAA.

КАК ПРИНИМАТЬ BCAA ВО ВРЕМЯ ТРЕНИРОВОК

В дни, когда у вас интенсивные физические нагрузки, организму нужно большое количество энергии и материала для строения мышечной массы.

При катаболическом процессе (разрушение структур до простых веществ) организм ищет источники энергии, если вы не зарядили его достаточным количеством белков и углеводов. Поэтому целесообразно начать принимать BCAA аминокислоты, которые способствуют анаболизму (синтез новых веществ, рост тканей) и замедляют катаболизм, при этом повышая вашу выносливость, давая необходимый материал для строительства мышц и ускоряя процесс жиросжигания.

Порцию аминокислот рекомендуется принимать до и после тренировки, а также во время, если тренировка длится более одного часа. Это поможет зарядиться энергией на время всей тренировки и замедлить процесс катаболизма, сохранив запас гликогена.

КАК ПРИНИМАТЬ BCAA В ДНИ ОТДЫХА

Существует ошибочное мнение, что в дни отдыха не нужно принимать никаких спортивных добавок. Однако, известно, что на следующий день после тренировки организм все еще нуждается в дополнительной подпитке. И чтобы он не начал «есть» сам себя, после сна рекомендуется выпить порцию BCAA — это подавит утренний катаболизм.

Как принимать bcaa в порошке ?

В чем же особенность приема bcaa в порошке? Можно смело сказать, что бцаа в порошке это более выгодная форма в плане цены и качества. Так как порошок легко усваивается, и его удобно принимать. Допустим вам нужно принять 5-10 грамм БЦАА, это равносильно 10 капсулам, конечно же 10 капсул принять за 1 раз не очень приятная процедура, а порошок можно развести в воде и выпить. Итог: bcaa в порошке это выгодно и удобно.

Как принимать bcaa в капсулах ?

Bcaa в капсулах упрощают прием, так как их удобно траспортировать и ненужно разводить с водой. Но есть пару минусов, чаще всего Bcaa в капсулах весьма дорогие, и их необходимо принимать в среднем по 10 капсул за раз. Но по качеству они не уступаю порошковым BCAA.

В какое время дня мы должны принимать BCAA?

В первую очередь до, во время и после тренировки. Можете растворять дозу порошка или капсул BCAA и пить на протяжении всей тренировки. Альтернативой является прием одной дозы BCAA за 15-30 минут до тренировки, а второй — сразу после ее окончания. Если вы тренируетесь утром натощак, примите одну дозу за 15-30 минут до тренировки.

Ели вы принимаете капсулы, тогда Вам нужно посмотреть в составе вашей добавки, какая дозировка bcaa на одну капсулу, и посчитать сколько нужно выпивать капсул чтобы получить разовую порцию 5-10 грамм.

Наверное вы замечали когда во время тренировки вы быстро устаете, на это есть множество причин. Но в любой ситуации пусть это будет тяжелый рабочей день или вы просто не выспались, прием bcaa всегда будет уместен. Аминокислоты помогут вашим мышцам работать на сто процентов, не причиняя вреда организму, даже наоборот если вы не будите подпитывает свой организм, ваши нагрузки будут вам только в ущерб.

Мужчинам — необходимо употреблять по пять приемов, по 5-6 г на каждый. Еще два приема – это сразу после пробуждения, и перед сном. Таким образом, вы загружаете организм необходимыми аминокислотами, чтобы он не «голодал» во сне, и получил необходимые питательные вещества сразу после пробуждения.

Женщинам — девушкам нужно всего 20 гр BCAA в день, можно разделить на 4 приема по 5 г. Если выбирать время для употребления между утром и вечером, то гораздо эффективнее будет пить именно утром. Во сне организм не слишком эффективно усваивает питательные вещества.

В дни отдыха девушкам будет достаточно 3 приема, а мужчинам – 4: утром, 1-2 раза между приёмами пищи и перед сном.

Неважно, набираете ли вы мышечную массу или худеете, bcaa необходимы в каждом случаи. Просто если вы худеете вам нужно сокращать процент суточной колоритности. В наборе мышечной массы, важен профецит калорий, рекомендую вам прочесть статью «Как набрать мышечную массу? «

Безопасны ли добавки BCAA?

Аминокислоты с разветвленной цепью составляют около трети незаменимых аминокислот в мышечной ткани, поэтому их можно безопасно принимать.

В некоторых редких случаях (при нарушениях обмена веществ и других заболеваниях) BCAA и продукты их метаболизма могут достигать токсичных уровней в организме, но это практически невозможно для здоровых людей. Интересно, что BCAA используются для лечения некоторых неврологических заболеваний и заболеваний печени.


src=»https://www.youtube.com/embed/Boo-ZuJD5xE» frameborder=»0″ allow=»accelerometer; autoplay; clipboard-write; encrypted-media; gyroscope; picture-in-picture» allowfullscreen=»»>

ДОЗИРОВКА И СОЧЕТАНИЕ С ДРУГИМИ ВИДАМИ СПОРТПИТА

Большинство экспертов утверждают, что на 1 кг веса человека необходимо 33 мг лейцина. Узнав соотношение аминокислот в добавке, вы легко рассчитаете нужное количество BCAA.

Обычно доза составляет от 5 до 10 г, в зависимости от веса человека. Аминокислоты BCAA отлично сочетаются практически со всеми видами спортивного питания. Например, их можно принимать вместе с протеиновым коктейлем. Сами по себе на вкус они горькие, поэтому лучше смешивать их с чем-то. Помните, что аминокислоты, впрочем, как другие виды спортпита, да и сам спорт в целом, не сочетаются с алкоголем.


В заключение.

BCAA являются хорошим дополнением к любому режиму человека, цель которого направлена на сжигание жира и поддержания мышечной массы или эффективное увеличение мышечной массы.


Надеемся, что прочтение статьи было для вас полезным! Будьте здоровы) С уважением Megapit.kz


Также вам могут понравится статьи на тему:

Поделитесь увиденным с друзьями!

SSAA Alice Springs — Информация о членстве

Если вы хотите участвовать в в мероприятиях IPSC в SSAA Alice Springs, вам необходимо стать членом IPSC NT.
Форму членства IPSC NT можно найти здесь.




Местное членство в SSAA Алис-Спрингс:
Если вы новичок в Алис-Спрингс, клуб приглашает вас приехать и попробовать различные стрелковые дисциплины, прежде чем стать его членом. Это позволяет вам почувствовать дисциплину, которой вы хотите следовать, а также убедиться, что вам удобно использовать огнестрельное оружие на стрельбище. Чтобы установить первоначальный контакт с клубом и с тем, что он может предложить, позвоните по номеру в комитет клуба .
Чтобы стать членом SSAA Alice Springs, вам необходимо стать членом следующих организаций:

1. SSAA National
2. Alice Springs Shooting Complex
3. SSAA Alice Springs Branch Inc

Сохранение текущего членства в SSAA National — это , обязательно , в то время как член SSAA Alice Springs Branch Inc.
Чтобы стать членом SSAA National, просто перейдите на их страницу New Member , заполните онлайн-форму, присоедините свое членство к Alice Springs (NT2) и Отправить.Вам нужно будет ввести свой национальный номер участника SSAA и дату истечения срока действия на портале членства SSAA в Алис-Спрингс, когда вы его получите, и поддерживать его в актуальном состоянии.

Становление национального члена SSAA дает множество преимуществ. Участники также могут привлекать своих детей, и приветствуются люди любого возраста и уровня подготовки. Членство в SSAA National дает вам доступ к стрельбищам по всей Австралии и на Северной территории, а также позволяет принимать участие в государственных, национальных и международных соревнованиях по стрельбе.

Стрелковый комплекс Алис-Спрингс является владельцем земли, на которой расположены SSAA Алис-Спрингс и другие клубы по стрельбе из лука. Таким образом, Стрелковый комплекс Алис-Спрингс и SSAA Алис-Спрингс предъявляют особые требования для обеспечения доступа к стрельбищам. Посещающие стрелки могут платить 20 долларов в день за использование стрельбища SSAA в Алис-Спрингс, но это возможно только в то время, когда участники присутствуют на стрельбищах, поскольку ворота стрелкового комплекса закрыты в любое другое время.В качестве альтернативы, став участником, вы получите доступ к воротам и доступ к диапазонам в любое утвержденное время.

Кандидаты могут подать заявку на участие в Стрелковом комплексе Алис-Спрингс и SSAA в Алис-Спрингс одновременно, просто зайдя на нашу страницу Присоединяйтесь к нам , заполнив онлайн-форму и отправив заявку на утверждение. В случае одобрения заявители получат уведомление о том, что их заявка была одобрена. После подтверждения членства новые участники могут подать заявку на получение доступа к диапазонам через один из замков без ключа, присутствующих на воротах, выразив интерес по электронной почте сотруднику по членству. После предоставления этот доступ будет действовать в течение всего срока вашего членства. Имейте в виду, что доступ к диапазону будет отменен, если ваши членские взносы станут неуплаченными или просроченными в любое время.

Членство обновляется ежегодно в июле, а новые членские взносы пропорциональны в зависимости от месяца подачи заявки.

Юные стрелки очень популярны в отделении SSAA в Алис-Спрингс. Все юниоры должны быть членами SSAA National, прежде чем подавать заявку на то, чтобы стать членами семьи или младшим членом Стрелкового комплекса Алис-Спрингс и SSAA Алис-Спрингс.SSAA Алис-Спрингс регулярно проводит соревнования по стрельбе из винтовки .22, в течение которых юные стрелки могут проходить обучение у опытных капитанов по дисциплинам. Пожалуйста, свяжитесь с клубом для получения более подробной информации.


Участие в различных стрелковых дисциплинах:
Для использования пистолета в Северной территории, , кроме объявленного «Дня открытых дверей» в клубе , вам необходимо держать ток (Категория H ) разрешение на стрельбу под наблюдением, лицензию спортивного стрелка категории H (старше 18 лет), разрешение юношеского клуба огнестрельного оружия (от 10 до 12 лет) или лицензию юниорского клуба огнестрельного оружия (от 12 до 18 лет). Дни открытых дверей объявляются, и посетители, желающие снимать под присмотром, могут выполнить базовую статистику и снимать в день. Огнестрельное оружие категорий A и B может использоваться под НЕПОСРЕДСТВЕННЫМ надзором правильно лицензированного владельца огнестрельного оружия.

Клубы и члены Клуба открыто поощряют посетителей в дни открытых дверей и имеют при себе огнестрельное оружие и боеприпасы.

Краткое описание лицензий: A / B для винтовок с кольцевым воспламенением, дробовиков и винтовок с центральным воспламенением, H для пистолетов. Чтобы получить лицензию в соответствии с действующим Законом, стрелок должен продемонстрировать настоящую причину.Истинными причинами являются охота и спортивная стрельба (A / B), спортивная стрельба только для H. SSAA Алис-Спрингс охватывает практически все дисциплины спортивной стрельбы, чтобы удовлетворить широкий круг любителей.
Посетите NT Firearm Licenses and Permit Forms для получения информации о подаче заявления на получение или продлении лицензии NT на огнестрельное оружие.

Следующие шаги являются руководством для получения лицензии: N.T. Лицензия стрелка: Категория A / B:
1. Присоединяйтесь к SSAA (NT), это можно сделать, войдя на национальный веб-сайт SSAA и введя свои данные (включая ваше местонахождение, Алис-Спрингс)
2. После того, как вы Как член, вы можете рассматриваться для членства в SSAA Alice Springs Branch Inc.
3. Получите «Разрешение на съемку на территории Короны» от Департамента земель, планирования и инфраструктуры.Для этого вам понадобится удостоверение личности с фотографией, есть небольшая плата.

Эти начальные шаги охватывают «истинные причины», требуемые в соответствии с Законом.

4. Перед тем, как подать заявку на получение лицензии, вам нужно будет доказать, что вы соответствуете стандарту безопасного хранения огнестрельного оружия. Для этого потребуется либо подписанная форма от лицензированного друга или родственника с сертифицированным сейфом, либо вы можете приобрести собственный сейф, который может быть сертифицирован. Для получения дополнительной информации о требованиях к хранению огнестрельного оружия на Северной территории, пожалуйста, обратитесь к руководству полиции.
5. Перед экзаменом на лицензию вам необходимо получить и изучить Национальный кодекс безопасности огнестрельного оружия. Копию можно получить в местном отделении полиции.
6. Перед экзаменом убедитесь, что у вас есть следующие предметы: 100 пунктов идентификации, подписанные документы о безопасном хранении, заявление на лицензию и «Разрешение на стрельбу на территории Короны». Экзамен — это примерно 20 вопросов.
7. Получив по почте лицензию A / B, вы можете стрелять из винтовок и дробовиков.Теперь вы также можете приобрести огнестрельное оружие категории A / B; однако после подачи разрешения на покупку существует 28-дневный период охлаждения.

Следующие шаги являются руководством для получения лицензии: N.T. Лицензия стрелка: Категория H
Если вы УЖЕ не являетесь членом клуба:

1. Присоединяйтесь к SSAA (NT), это можно сделать, войдя на национальный веб-сайт SSAA и введя свои данные (включая ваше местоположение , Алис-Спрингс)
2.После того, как вы станете участником, вы можете быть рассмотрены на членство в SSAA Alice Springs Branch Inc.

Then:

Важно: встретитесь с членом комитета и дисциплинарным капитаном, чтобы обсудить вопрос о стрельбе из пистолета.
Если вы еще не являетесь членом или знакомы с Комитетом или Дисциплинарным капитаном, не ожидайте немедленной поддержки Клуба. Ожидается, что вы будете присутствовать на запланированных стрельбах по стрельбе из пистолета, встретиться с другими членами, ознакомиться с протоколом и иметь общее представление о правилах стрельбища ДО того, как вам будет предоставлена ​​поддержка для разрешения.

3. Вам необходимо будет предоставить Комитету две письменные (отправленные по электронной почте секретарю) ссылки на персонажей ДО получения Клуба поддержки для разрешения H на съемку под наблюдением.
4. Получить подтверждающую документацию о членстве, также известную как «Свидетельство о членстве в клубе огнестрельного оружия», которое было одобрено уполномоченным лицом клуба.
5. Вам не обязательно соответствовать требованиям безопасного хранения для получения разрешения на стрельбу под наблюдением, но вы должны иметь его, чтобы получить лицензию спортивного стрелка категории H.
Вы не можете приобрести пистолет, пока у вас не будет лицензии в течение 6 месяцев, И если у вас для этого не будет поддержки Club.
НЕ СПРОСИТЕ и НЕ ОЖИДАЙТЕ купить пистолет, если вы не соответствуете этим критериям. Ожидается, что в первые шесть месяцев вы будете посещать Клуб 2–3 раза в месяц.
6. Прежде чем подать заявку на получение лицензии, вам необходимо доказать, что вы соответствуете стандарту безопасного хранения огнестрельного оружия. Для этого потребуется либо подписанная форма от лицензированного друга или родственника с сертифицированным сейфом, либо вы можете приобрести собственный сейф, который может быть сертифицирован.Для получения дополнительной информации о требованиях к хранению огнестрельного оружия на Северной территории, пожалуйста, обратитесь к руководству полиции.


Передача между штатами:
Если ваша лицензия, выданная другим штатом или территорией, все еще действительна, вам не нужно будет снова сдавать экзамен по безопасности. Ваше огнестрельное оружие необходимо будет проверить для подтверждения серийных номеров, прежде чем его можно будет зарегистрировать на Северной территории. Обязательно возьмите с собой копию лицензии и всю документацию на огнестрельное оружие при подаче заявления на регистрацию.
Важная информация о лицензировании:
— Перед выдачей лицензии будет проводиться полная проверка криминального прошлого для каждого приложения. При заполнении анкеты полностью раскрывайте всю криминальную историю (включая преступления несовершеннолетних).
— Вы должны получить все правильные ответы на экзамене по безопасности, чтобы иметь возможность получить лицензию на огнестрельное оружие. Если ответ неверен, вам придется подождать минимум 21 день, чтобы снова сдать экзамен.

SSAA SA — Ассоциация спортивных стрелков Южной Австралии

Охота

Департамент окружающей среды и водных ресурсов (DEW) Информация об охоте

Департамент окружающей среды и водных ресурсов (разрешение на охоту)

Разрешение на охоту

Вся охота в Южной Австралии регулируется Законом о национальных парках и дикой природе 1972 года (Закон NPW) и Положениями о национальных парках и дикой природе (охота) 2011 года.

Если вы хотите охотиться в Южной Австралии, у вас должно быть базовое разрешение на охоту, если вы не являетесь:

  • уничтожение животных, угрожающих жизни человека.
  • уничтожение животных (кроме охраняемых видов), которые наносят ущерб урожаю, скоту или другому имуществу на вашей земле (вашей собственности или собственности работодателя).
  • ввоз животных в соответствии с любыми другими разрешительными правилами.

Охраняемые местные животные и охота

Большинство местных млекопитающих, рептилий и птиц полностью защищены.Без этой защиты многие виды могут исчезнуть навсегда. Закон NPW действительно позволяет объявлять открытые сезоны, чтобы можно было охотиться на определенные виды охраняемой дичи (уток и перепелов).

Незащищенные местные животные, интродуцированные животные и охота

Незащищенные местные животные перечислены в Приложении 10 Закона NPW. У вас все еще должно быть разрешение на охоту, прежде чем вы сможете охотиться на незащищенных местных животных или интродуцированных животных,

Согласно Закону учитываются охота и добыча пищи аборигенами.

Дополнительная информация:

В Южной Австралии следующие виды классифицируются как дичь и могут вылавливаться в течение объявленного открытого сезона:

    • Щетина перепела
    • Утка тихоокеанская черная
    • Серо-бирюзовый
    • Hardhead (белоглазая утка)
    • Горная утка (Австралийская овчарка)
    • Утка с розовыми ушами
    • Гривеная утка (древесная утка)
    • Каштан бирюзовый
    • Лопатка синекрылая

В Южной Австралии следующие виды классифицируются как дикие и могут быть взяты в любое время на частной территории с разрешения землевладельцев:

    • Дикая коза
    • Свинья
    • Верблюд
    • Олень
    • Кролик
    • Рыжая лисица
    • Скворец
    • Домашний голубь
    • Черный дрозд европейский
    • Горлица пятнистая

Для получения дополнительной информации или определения необходимости разрешения, пожалуйста, обращайтесь:

Отдел выдачи разрешений на использование фауны DEW
Телефон: (+61 8) 8124 4972
Эл. Почта: dewfaunapermitsunit @ sa.gov.au

Утиная охота

Для вылова / охоты на уток требуется разрешение на охоту на уток в открытом сезоне.

Департамент окружающей среды и водных ресурсов (DEW) Информация об охоте

Департамент окружающей среды и водных ресурсов (разрешение на охоту)

Если вы подаете заявление на разрешение на охоту на уток, вы должны сдать и пройти идентификационный тест на водоплавающих птиц (WIT). Вам потребуется ваш номер WIT, чтобы заполнить заявку.

Обучение и тестирование по идентификации водоплавающих птиц

Чтобы получить разрешение на участие в открытом сезоне охоты на уток в Южной Австралии, вы должны успешно пройти идентификационный тест на водоплавающих птиц.Этот тест предназначен для охотников, чтобы продемонстрировать, что они могут определять водно-болотных птиц и их природоохранный статус, чтобы убедиться, что они выбраны для охоты на правильные виды.

Испытание проводится Департаментом окружающей среды и водных ресурсов.

Обучение

Союз охраны природы и охоты Южной Австралии (CHASA) обеспечивает комплексное обучение по идентификации водоплавающих птиц, чтобы позволить собирающимся охотникам на уток с уверенностью пройти тест на определение водоплавающих птиц.

Курсы проводятся на регулярной основе до и во время сезона охоты и по запросу.

Курс стоит 65 долларов, и в него входит обучение и вся учебная литература, включая печатные справочные материалы и видео. Обычно тренировки проходят в нерабочее время.

Для участия в тренинге CHASA по идентификации водоплавающих птиц заполните форму заявки и отправьте ее в CHASA по почте или электронной почте.

Уникальные функции протеинкиназы D1 и протеинкиназы D2 в клетках млекопитающих

Biochem J. 15 ноября 2010; 432 (Pt 1): 153–163.

, *, 1 , †, 1 , , , и †, 2

Шарон А.

Мэтьюз

* Отделение медицинских наук, Больница Найнуэллс и медицинская школа, Университет Данди, Данди DD1 9SY, Шотландия, Великобритания

Мария Н. Наварро

† Колледж наук о жизни, Отдел иммунологии и клеточной биологии, Университет Данди , Dow Street, Dundee DD1 5EH, Scotland, UK

Linda V. Sinclair

† Колледж наук о жизни, Отдел иммунологии и клеточной биологии, Университет Данди, Dow Street, Dundee DD1 5EH, Шотландия, Великобритания

Элизабет Эмсли

† Колледж наук о жизни, Отдел иммунологии и клеточной биологии, Университет Данди, Dow Street, Dundee DD1 5EH, Scotland, U.K.

Кармен Фейжу-Карнеро

† Колледж наук о жизни, Отдел иммунологии и клеточной биологии, Университет Данди, Доу-стрит, Данди DD1 5EH, Шотландия, Великобритания

Дорин А. Кантрелл

† Колледж наук о жизни , Отдел иммунологии и клеточной биологии, Университет Данди, Доу-стрит, Данди DD1 5EH, Шотландия, Великобритания

* Отделение медицинских наук, Больница Найнуэллс и медицинская школа, Университет Данди, Данди DD1 9SY, Шотландия, Великобритания

† Колледж наук о жизни, Отдел иммунологии и клеточной биологии, Университет Данди, Доу-стрит, Данди DD1 5EH, Шотландия, U. K.

1 Эти авторы внесли равный вклад в данную работу.

Поступила 30 июля 2010 г .; Пересмотрено 31 августа 2010 г .; Принято 7 сентября 2010 г.

Copyright © yyyy Автор (ы) Автор (ы) заплатил за эту статью, чтобы она была свободно доступна в соответствии с условиями некоммерческой лицензии Creative Commons Attribution (http://creativecommons.org/licenses) /by-nc/2.5/), который разрешает неограниченное некоммерческое использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии правильного цитирования оригинальной работы.

Эта статья цитируется в других статьях в PMC.

Abstract

Изоформы PKD млекопитающих (протеинкиназа D) участвуют в регуляции различных биологических процессов в ответ на передачу сигналов диацилглицерина и PKC (протеинкиназы C). Чтобы сравнить функции PKD1 и PKD2 in vivo , мы создали мышей, дефицитных по ферментативной активности PKD1 или PKD2, посредством гомозиготной экспрессии аллелей PKD1 S744A / S748A или PKD2 S707A / S711A «нокаин». Мы также исследовали мышей с дефицитом PKD2, полученных с использованием технологии «генных ловушек». Мы демонстрируем, что, в отличие от PKD1, каталитическая активность PKD2 необходима для нормального эмбриогенеза. Мы также показываем, что PKD2 является основной изоформой PKD, экспрессируемой в лимфоидных тканях, но что каталитическая активность PKD2 не является существенной для развития зрелых периферических Т- и В-лимфоцитов.Однако каталитическая активность PKD2 требуется для эффективного индуцируемого рецептором антигена продукции цитокинов в Т-лимфоцитах и ​​для оптимального Т-клеточно-зависимого ответа антител in vivo . Наши результаты показывают ключевую роль in vivo PKD2 в регуляции функции зрелых периферических лимфоцитов во время адаптивных иммунных ответов. Они также подтверждают функциональную важность PKC-опосредованного фосфорилирования серина каталитического домена PKD для активации PKD и последующей передачи сигналов и показывают, что разные члены семейства PKD выполняют уникальные и не повторяющиеся роли in vivo .

Ключевые слова: цитокин, лимфоцит, протеинкиназа C (PKC), протеинкиназа D (PKD), рецептор Т-клеточного антигена (TCR)

Сокращения: DAG, диацилглицерин; DN, дважды отрицательный; ДП, дважды положительный; ERK1 / 2, киназа 1/2, регулируемая внеклеточными сигналами; ES, эмбриональный стебель; FBS, фетальная бычья сыворотка; IFNγ, интерферон γ; ИЛ-2, интерлейкин 2; NF-κB, ядерный фактор κB; NP, 4-гидрокси-3-нитрофенилацетил; НП-40, Nonidet P40; ПЭ, фикоэритрин; PKC, протеинкиназа C; PKD, протеинкиназа D; SP, однократно положительный; TCR, рецептор Т-клеточного антигена

ВВЕДЕНИЕ

Семейство сериновых / треониновых PKD (протеинкиназы D) млекопитающих включает три различных, но близкородственных сериновых киназы, PKD1, PKD2 и PKD3, каждая из которых имеет высококонсервативный N- концевой регуляторный домен, содержащий два богатых цистеином DAG (диацилглицерин) -связывающих домена и аутоингибиторный домен PH (гомология плекстрина). Члены семейства PKD активируются связыванием DAG с их регуляторным доменом и опосредованным PKC (протеинкиназой C) фосфорилированием двух консервативных остатков серина в их каталитическом домене в ответ на передачу сигналов фосфолипазы C и DAG [1]. PKD являются высококонсервативными ферментами, причем PKD1 и PKD2 являются наиболее близкими из трех изоформ PKD млекопитающих, демонстрируя ~ 85% общей идентичности на уровне аминокислот. В частности, их каталитические домены и их регуляторные DAG-связывающие домены, которые являются ключевыми для контроля внутриклеточной локализации этих протеинкиназ, очень гомологичны.Одним из следствий высокого уровня консервативности PKD1 и PKD2 является то, что было трудно разработать антитела, которые могли бы различать эти изоформы, хотя существуют антитела, которые избирательно распознают PKD3. Соответственно, многие исследования функции PKD не указывают, какая изоформа PKD изучается. Это важно, поскольку PKD1 и PKD2 имеют общие регуляторные механизмы во многих типах клеток. Например, эктопически экспрессируемый GFP (зеленый флуоресцентный белок), помеченный PKD1, и эндогенный PKD2 демонстрируют идентичные механизмы и кинетику активации, инактивации и субклеточного переноса в ответ на запуск рецептора антигена в лейкемической Т-клеточной линии Jurkat и в B-клетках лимфомы A20. [2,3].

Многие взрослые ткани и клеточные линии демонстрируют коэкспрессию различных изоформ PKD, и очевидно, что между этими разными членами семейства PKD может существовать функциональная избыточность. Например, птицы экспрессируют две изоформы PKD, которые наиболее близко напоминают PKD1 и PKD3 млекопитающих, и любая из этих двух киназ может фосфорилировать и регулировать ядерный экспорт HDAC5 и HDAC7 класса II HDAC5 и HDAC7 в В-клетках птиц [4] . Сходным образом, множественные изоформы PKD, по-видимому, избыточно регулируют организацию Гольджи и транспорт белка [5–9], активацию NF-κB (ядерного фактора κB) и реакции выживания клеток [10–12], а также высвобождение хемокинов из активированных Toll-подобных рецепторов. эпителиальные клетки [13].Функциональная избыточность между различными изоформами PKD также наблюдалась при фосфорилировании субстратов PKD, таких как CERT (белок, транспортирующий церамид) [14], PAR1b (дефектное разделение 1) [15], сфингозинкиназа 2 [16] и HSP27 (теплоотдача). шоковый белок 27) [17,18].

Функциональная избыточность между разными членами семейства PKD, экспрессируемыми в одних и тех же тканях / клетках, однако, не всегда имеет место. Например, PKD-опосредованное фосфорилирование фосфоинозитид-4-киназы IIIβ регулируется PKD1 и PKD2, но не PKD3 [19].Кроме того, существует различное время экспрессии изоформ PKD во время раннего эмбриогенеза мышей [20], и есть примеры типов клеток, где экспрессия одной изоформы PKD, по-видимому, доминирует. Следовательно, специфические и не повторяющиеся роли PKD1 в регуляции секреции инсулина β-клетками поджелудочной железы [21], TLR (Toll-подобный рецептор) -зависимой экспрессии цитокинов в макрофагах [22], пролиферации кератиноцитов [23] и патологического ремоделирования сердца in vivo было идентифицировано [24].

Наше понимание функций различных изоформ PKD млекопитающих осложняется еще и наблюдением, что различные пулы белков PKD наблюдаются в разных внутриклеточных сайтах, включая плазматическую мембрану, цитоплазму, Гольджи, митохондрии и ядро ​​[25]. Кроме того, разные изоформы PKD могут по-разному локализоваться в одной и той же клетке [26]. Было также показано, что PKD перемещаются между различными участками клетки в ответ на специфические стимулы [2, 3, 27, 28], что имеет серьезные последствия для функции этих ферментов.Таким образом, локализованная по Гольджи PKD регулирует фосфорилирование фосфоинозитид-4-киназы IIIβ и перенос пузырьков [19], тогда как митохондриальная PKD контролирует экспрессию SOD2 (супероксиддисмутазы 2) посредством активации NF-κB [29]. Сходным образом белки PKD, нацеленные на плазматическую мембрану, и цитозольные белки PKD регулируют различные аспекты дифференцировки Т-клеток [30].

В совокупности эти данные свидетельствуют в пользу уникальных функций для разных членов семейства ДОК в разных сотовых контекстах. Эффективный способ исследовать физиологическую роль отдельных изоформ PKD — это изучить последствия удаления отдельных ферментов с использованием стратегий нацеливания на гены у мышей.Этот подход использовался ранее для исследования роли PKD1, показывая, что гомозиготная делеция PKD1 в зародышевой линии вызывает эмбриональную летальность [24]. Более того, специфичная для кардиомиоцитов делеция PKD1 также выявила уникальную и неизбыточную роль PKD1 в патологическом ремоделировании сердца [24]. Также был описан мутантный штамм мышей (129S5- Prkd3 Gt ( OST1 ) Lex / Mmcd), который несет делецию генной ловушки PKD3.Сообщается, что мыши жизнеспособны, и фенотипический анализ выявил лишь незначительные аномалии скелета. Однако на сегодняшний день не было исследований, в которых изучалась бы роль PKD2 in vivo , хотя есть несколько исследований in vitro с использованием методов РНКи (РНК-интерференция) в клеточных линиях, которые предполагали важные неизбыточные функции для ПКД2. Они включают ключевую роль PKD2 в эндотелиальных клетках, чтобы контролировать пролиферацию и выживаемость клеток и способствовать ангиогенезу [31], а в моноцитах — контролировать миграционные ответы [32].Соответственно, целью настоящего исследования было создание моделей мышей, которые позволили бы изучить роль PKD2 в физиологических ответах во время эмбриогенеза и у взрослых мышей.

Данные показывают, что мыши с дефицитом ферментативной активности PKD2 родились с нормальной менделевской частотой, были фертильными и здоровыми. Поразительно, что мы наблюдали, что PKD2, но не PKD1, избирательно экспрессируется в лимфоидных клетках взрослых мышей, но что потеря каталитической активности PKD2 не оказала очевидного влияния на развитие зрелых Т- и В-лимфоцитов.Однако каталитическая функция PKD2 была важна для продукции эффекторных цитокинов после вовлечения TCR (рецептора Т-клеточного антигена), а также для оптимальной индукции ответов антител на модельный антиген. Данные показывают, что каталитическая активность PKD1, но не PKD2, важна для нормального развития эмбриона, и что PKD2, но не PKD1, играет важную роль у взрослых мышей в контроле функции лимфоидных клеток во время адаптивных иммунных ответов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Получение трансгенных мышей PKD2 и PKD1

Мышей с PKD2-нокином на фоне C57BL / 6 были получены с помощью Ozgene.Вкратце, геномные фрагменты, содержащие экзоны 15-17 гена Prkd2 , амплифицировали с помощью ПЦР из геномной ДНК C57BL / 6 для создания плеч 5 ‘и 3’ гомологии, которые использовали для фланкирования loxP-PGK- Neo R -LoxP селекционная кассета. Мутации (подчеркнутые) в плече 5′-гомологии, которые кодируют точечные мутации аланина Ser 707 и Ser 711 (5′-GAGAAGGCCTTCCGGCGCGCCGTG-3 ‘), вводили с помощью ПЦР. Прямое и обратное секвенирование ДНК и расщепление ферментами рестрикции подтвердили целостность конечной конструкции нацеливания.После гомологичной рекомбинации нацеливающего вектора в клетках C57BL / 6 ES (эмбриональные стволовые) клоны с правильной мишенью были идентифицированы с помощью саузерн-блоттинга. Целостность точечных мутаций по Ser 707 и Ser 711 в ES-клетках-мишенях подтверждали скринингом ПЦР и секвенированием ДНК. Нацеленные клоны ES-клеток микроинъектировали в бластоцисты C57BL / 6 для получения химерных животных. После установления передачи по зародышевой линии кассета PGK- Neo R была удалена путем скрещивания с трансгенной линией, содержащей рекомбиназу Cre, вставленную в локус Rosa26 (мыши-делетеры OZ Cre).Селективное разведение использовали для устранения гена Cre и мышей PKD2 SSAA (PKD2 S707A / S711A ) -knockin поддерживали на чистом генетическом фоне C57BL / 6. Генотипирование проводили методом ПЦР геномной ДНК с использованием праймеров 671-5’armF (5′-AGTGGCACGTTCCCCTTCAATG-3 ‘) и 671-3’armR (5′-CTTTGCCCAATCCCTTACAGCCT-3’), продуцирующих продукты длиной 236 п.н. [PKD2 WT (PKD2 дикого типа)] и 344 п.н. (PKD2 SSAA ).

Похожая методика была применена для получения PKD1 SSAA (PKD1 S744A / S748A ) -кнокин мышей, за исключением того, что нуклеотиды, кодирующие Ser 744 и Ser 748 , были мутированы в аланин (5′-GCCTTCCTAGGAG ). Генотипирование проводили с помощью ПЦР геномной ДНК с использованием праймеров 579-5’armF2 (5’CAGCCTTCATGTATCCACCCAACC) и 579-3’armR (5’TGAACAACAGCAGAGCCCTAACAG), продуцирующих продукты размером 512 п.н. (PKD1 WT ) и 641 п.н. SSAA ).

Получение мышей с мутантной ловушкой для гена PKD2

Мышей с дефицитом PKD2 получали с помощью метода генной ловушки на основе ретровируса. Линия ES-клеток E14Tg2a.4 (полученная из линии мыши 129 / OlaHsd), содержащая кассету-ловушку для генов, вставленную в локус Prkd2 (RRJ380, Bay Genomics), была введена в бластоцисты C57Bl / 6J, которые впоследствии были имплантированы реципиенту. самки мышей.ES-клетки подвергали анализу последовательности ДНК перед микроинъекцией, чтобы подтвердить, что клеточная линия содержит только одну кассету-ловушку для гена, расположенную в локусе PKD2 . Полученных химерных мышей скрещивали с фоном C57BL / 6 для получения передачи по зародышевой линии. Генотипирование проводили методом ПЦР геномной ДНК с использованием праймеров PKD2-GTF6 (5′-GTTCCCCTTCCAGTCCATAATCCTCCT-3 ‘), PKD2-GTR2 (5′-CGATGATGCGAGCGAAGCCAAA-3′) и B-geo5’R2 (5’-TGGCCAGT) ) в одной ПЦР с получением продуктов размером 498 п. н. [PKD2 GT (генная ловушка PKD2)] и 441 п.н. (PKD2 WT ).Все эксперименты на мышах проводились на смешанном фоне 129-C57BL / 6J.

Всех мышей разводили и содержали в определенных условиях, свободных от патогенов, в биоцентре Wellcome Trust при Университете Данди в соответствии с положениями Закона Великобритании о домашних животных (научные процедуры) 1986 года.

Культура клеток

Селезенки, тимус и лимфатические узлы удаляли у мышей в возрасте 2–4 месяцев, измельчали ​​в клеточных фильтрах и дезагрегировали, а эритроциты лизировали по мере необходимости перед тем, как лимфоциты суспендировали в среде RPMI 1640, содержащей L -глутамин (Invitrogen) с 10% (об. / об.) инактивированной нагреванием FBS (фетальная бычья сыворотка), 50 единиц / мл пенициллина, 50 мкг / мл стрептомицина и 50 мкМ 2-меркаптоэтанола.Клетки активировали 200 нМ форбол 12,13-дибутирата, 2 мкМ пептида OVA (SIINFEKL) или указанными концентрациями анти-CD3ϵ-антитела (клон 2C11), как указано, при плотности прибл. (1-2) × 10 6 клеток / мл.

Вестерн-блоттинг

Экспрессию и фосфорилирование белка оценивали с использованием стандартных протоколов вестерн-блоттинга. Вкратце, лизаты клеток (2 × 10 7 клеток или 100 мкг ткани на мл буфера для лизиса) были приготовлены на льду с использованием буфера для лизиса NP-40 (Nonidet P40) (50 мМ Hepes, pH 7.4, 75 мМ NaCl, 1% NP-40, 10 мМ NaF, 10 мМ иодацетимид, 1 мМ ЭДТА, 40 мМ 2-глицерофосфат, ингибиторы протеаз и 1 мМ PMSF), а затем центрифугировали при 16000 g в течение 10 мин. при 4 ° C. Образцы белка (0,25-0,5 миллиона эквивалентов клеток или 40 мкг тканевого экстракта) были разделены с помощью SDS / PAGE (8% или 4-12% гелей), перенесены на PVDF-мембраны и заблокированы 5% (мас. / Об.) Не содержащими вещества. сухое обезжиренное обезжиренное молоко в PBS / Tween 20. Блоты зондировали антителами, распознающими различные фосфорилированные и нефосфорилированные (общие) белки, как указано.

Иммунопреципитация и

in vitro Анализы киназ

Эндогенные изоформы PKD были иммунопреципитированы из клеточных лизатов с помощью перекрестно реагирующего антитела PKD1 / 2 [33] или PKD3-специфического антитела [34] и восстановлены с помощью протеина A− Бусины сефарозы. Фосфорилирование экзогенного субстрата иммунопреципитированными белками PKD измеряли по включению [γ- 32 P] АТФ в синтетический пептид субстрата PKD (KKLNRTLSVA), как описано ранее [34].

Проточная цитометрия

Если не указано иное, антитела, конъюгированные с FITC, PE (фикоэритрин), PE-Cy5.5 (индодикарбоцианин), PE-Cy7 (индотрикарбоцианин) или APC (аллофикоцианин), были получены от BD Pharmingen или eBioscience. Клетки окрашивали на предмет экспрессии на клеточной поверхности следующих антигенов (клоны указаны в скобках): CD4 (RM4-5), CD8 (53-6,7), TCR-β (H57-597), B220 (RA3-6B2), IgD (11-26) и IgM (11/41). DN (дважды отрицательные) и DP (дважды положительные) тимоциты определяли по окрашиванию CD8 и CD4. Зрелые тимоциты SP (однократно положительные) были определены как TCRβ Hi и положительны по экспрессии CD4 или CD8. При необходимости рецепторы Fc блокировали с помощью мышиного блока Fc (CD16 / CD32; рецептор FcγIII / II; 2.4G2) (BD Pharmingen). Клетки окрашивали насыщающими концентрациями антитела в соответствии с инструкциями производителя, промывали и ресуспендировали в среде RPMI 1640, содержащей 1% FBS, перед сбором. Живые клетки были заблокированы в соответствии с их прямым и боковым рассеянием.Данные были получены на проточном цитометре FACSCalibur (Becton Dickinson) и проанализированы с использованием программного обеспечения FlowJo (Treestar).

Цитокин ELISA

Лимфатические узлы собирали и дезагрегировали. CD4 + и CD8 + Т-клетки очищали отрицательной селекцией с использованием набора CD4 + T Cell Isolation или CD8 + T Cell Isolation Kit (Miltenyi Biotec) с помощью магнитной сортировки клеток (AutoMacs, Miltenyi Biotec). Клетки стимулировали различными количествами анти-CD3ϵ (клон 2C11). Через 18 ч супернатанты собирали и определяли продукцию цитокинов [IFNγ (интерферон γ) и IL-2 (интерлейкин 2)] с помощью ELISA с использованием Mouse IFNγ ‘Femto-HS’-ELISA Ready-Set-Go и Mouse IL2-ELISA Ready. -Set-Go комплекты (eBiosciences) в соответствии с инструкциями производителя.

Иммунизация и ИФА Ig

Мышей соответствующего пола и возраста в возрасте 8–12 недель иммунизировали подкожно 100 мкг NP (4-гидрокси-3-нитрофенилацетил) -OVA (Biosearch Technologies), предварительно адсорбированного на гидроксид алюминия (Pierce). Сыворотки собирали через 0, 8, 14 и 29 дней. Уровни общего и NP-специфического Ig определяли стандартным ELISA с использованием связанных с планшетом антимышиных Ig (тяжелая и легкая цепи) или NP-BSA 33 и козьих антимышиных антител, конъюгированных с щелочной фосфатазой (SouthernBiotech).Реакцию выявляли с помощью pNPP (p, -нитрофенилфосфат) (Sigma) с последующим измерением оптической плотности при 405 нм. Стандарты очищенного изотипа Ig использовали для количественного определения уровней специфического Ig.

Статистический анализ

Статистический анализ выполняли с использованием GraphPad Prism 5.00 для Macintosh (программное обеспечение GraphPad). P <0,05 считалось статистически значимым.

РЕЗУЛЬТАТЫ

PKD1, но не PKD2, играет важную роль в эмбриогенезе мышей

PKD сериновые киназы представляют собой большие белки, содержащие несколько доменов взаимодействия, включая как белок-белок-, так и белок-липид-связывающие области, и обладают потенциалом к функционируют как строительные леса.Чтобы изучить физиологическую роль PKD2 in vivo , мы поэтому решили создать мышей, у которых аллели PKD2 дикого типа были заменены мутантными аллелями, кодирующими замены аланина для Ser 707 и Ser 711 в области петли активации каталитического домена PKD. . Фосфорилирование этих двух сериновых остатков является критическим для каталитической активности PKD2 [36], следовательно, исследования мышей PKD2 SSAA позволяют оценить важность каталитической активности PKD2 in vivo , минуя любое влияние удаления каркасной функции PKD2. Соответственно, мутации PKD2 S707A и S711A были нокаутированы в локусе Prkd2 дикого типа в ES-клетках мыши путем гомологичной рекомбинации. Полученные ES-клетки использовали для получения мышей, экспрессирующих PKD2 SSAA под контролем его естественного промотора (). Предыдущие исследования показали, что гомозиготная делеция аллелей PKD1 вызывает эмбриональную летальность [24]. В противоположность этому, гомозиготные мыши PKD2 SSAA -knockin были жизнеспособными, фертильными и фенотипически неотличимы от своих однопометников дикого типа (C и результаты не показаны).Это предполагает, что нормальное эмбриональное развитие не нарушается потерей каталитической функции PKD2.

Создание мышей с мутацией knockin PKD2

( A ) Изображение эндогенного мышиного аллеля Prkd2 , содержащего экзоны 10–18, конструкцию knockin и целевой аллель с кассетой неомицина, удаленной рекомбиназой Cre . Черные / серые прямоугольники представляют экзоны, а черные стрелки представляют сайтов LoxP . Толстые черные линии указывают положения зондов, используемых для анализа саузерн-блоттингом.Аллель нокина, содержащий мутацию Ser 707 / Ser 711 в экзоне 16, показан серым прямоугольником. ( B ) Генотипы мышей с мутантом PKD2 SSAA определяли с помощью ПЦР-амплификации геномной ДНК. Аллель дикого типа генерирует продукт длиной 236 п.н., тогда как аллель нокина генерирует продукт 344 п.н. Более крупный продукт аллеля нокина обусловлен присутствием сайта LoxP из 108 п.н. и фланкирующей области, которая остается в интронной области после опосредованного Cre иссечения кассеты селекции неомицина.( C ) Были созданы гетерозиготные вязки для мышей PKD2 SSAA , и потомство было генотипировано, как описано в разделе «Материалы и методы». Количество (и процент) каждого наблюдаемого генотипа с последующей его ожидаемой менделевской частотой. P = 0,482 (χ 2 тест).

Мы рассмотрели возможность того, что небольшая остаточная каталитическая активность, все еще присутствующая в мутантном белке PKD2 SSAA (см. A), может быть достаточной для нормального эмбриогенеза.Поэтому, чтобы подтвердить нашу гипотезу, мы создали две дополнительные модели мутантных мышей PKD. В первом аллели PKD1 дикого типа были заменены мутантными аллелями PKD1, лишенными критических PKC-зависимых сайтов фосфорилирования серина, Ser 744 и Ser 748 (A). Мы также создали мышей с дефицитом PKD2 (мыши PKD2 GT ), используя линию ES-клеток, содержащую кассету с генной ловушкой, вставленную в локус Prkd2 (C). Наш анализ последовательности ДНК этой линии ES-клеток подтвердил, что клеточная линия содержала только одну кассету-ловушку для гена, расположенную в локусе PKD2 .Мы сопоставили сайт вставки генной ловушки с интроном 15, который разрушает и устраняет каталитический домен PKD2 (C). Важно отметить, что мыши PKD2 GT / GT родились с нормальной ожидаемой частотой (E) и были жизнеспособными, фертильными и фенотипически неотличимыми от своих однопометников дикого типа. Напротив, когда гетерозиготные мыши PKD1 SSAA были скрещены, новорожденных мышей дикого типа и гетерозиготных мышей, но не гомозиготных мышей PKD1 SSAA , легко идентифицировать (E). Из 177 наблюдаемых живорождений две мыши были гомозиготными по аллелю PKD1 SSAA (~ 1%).Это указывает на то, что гомозиготная экспрессия аллеля PKD1 SSAA вызывает эмбриональную летальность с неполной пенетрантностью. Это согласуется с отчетом Olson и его коллег о том, что делеция экзонов 12-14 PKD1, которая устраняет каталитический домен PKD1, также вызывает эмбриональную летальность с неполной пенетрантностью [24]. Анализ стадии эмбриогенеза, который требует каталитической активности PKD1, показал, что нормальные менделевские частоты гомозиготных по PKD1 плодов SSAA могут быть идентифицированы до 9 дня.5 эмбриогенеза, но не позже (E). Следовательно, большинство эмбрионов с гомозиготными заменами по аллелю PKD1 SSAA погибают на ранней стадии развития. В совокупности эти результаты демонстрируют, что каталитическая активность PKD1, но не PKD2, важна для нормального эмбриогенеза мыши.

Создание мутантных мышей с ловушкой для гена PKD2 и мышей с мутантами по PKD1

( A ) Изображение эндогенного мышиного аллеля Prkd1 , содержащего экзоны 15-17, конструкцию нокаина и целевой аллель с удаленной кассетой неомицина по рекомбиназе Cre .Белые / серые прямоугольники представляют экзоны, а черные стрелки представляют сайтов LoxP . Толстые черные линии указывают положения зондов, используемых для анализа саузерн-блоттингом. Аллель нокина, содержащий мутацию Ser 744 / Ser 748 в экзоне 16, показан серым прямоугольником. ( B ) PKD1 SSAA -knockin мышей генотипировали с помощью ПЦР-амплификации геномной ДНК по сайту вставки LoxP, как описано в разделе «Материалы и методы».( C ) Изображение аллеля Prkd2 дикого типа и нацеленного на генную ловушку аллеля Prkd2 , присутствующих в клеточной линии E14Tg2a. 4 ES. Эта вставка нарушает структуру каталитического домена и удаляет несколько ключевых мотивов, которые важны для катализа и связывания субстрата (мотивы DFG и APE), а также сайты фосфорилирования Ser 707 и Ser 711 , которые важны для активации PKD2. ( D ) Мышей PKD2 GT генотипировали с помощью ПЦР-амплификации геномной ДНК, как описано в разделе «Материалы и методы».( E ) Были созданы гетерозиготные спаривания для мышей PKD2 GT и мышей PKD1 SSAA , и живое потомство и эмбрионы-нокаин PKD1 SSAA были генотипированы, как описано в разделе «Материалы и методы». Показано количество (и процент) каждого наблюдаемого генотипа, а затем его ожидаемая менделевская частота. Данные были проанализированы с использованием критерия χ 2 для определения статистической значимости.

PKD2 является доминирующей изоформой PKD, экспрессируемой в лимфоидной ткани и клетках мыши.

( A ) Глобальная каталитическая активность PKD1 / 2 в тимоцитах дикого типа и мутантных PKD2.Белки PKD1 / 2 были иммунопреципитированы из тимоцитов, активированных сложным форболовым эфиром, с использованием антисыворотки pan-PKD1 / 2 [33] до того, как каталитическая активность PKD была измерена в анализах in vitro пептидных субстратных киназ , как описано в разделе «Материалы и методы». Данные взяты из восьми дикого типа, восьми PKD2 GT / GT и шести PKD2 SSAA / SSAA тимуса, проанализированных в трех отдельных экспериментах. Результаты — это средства + S.E.M .; Статистическая значимость рассчитывалась по критерию Стьюдента t .( B ) Аутофосфорилирование PKD1 / 2 по Ser 916 и Ser 873 , соответственно, в экстрактах цельных клеток, приготовленных из контрольных и активированных форболовым эфиром дикого типа, гетерозиготных и гомозиготных PKD2 GT и PKD2 SSAA SSAA тимоциты. Кляксы представляют два независимых эксперимента. ( C ) Анализ петли активации PKD и фосфорилирования ERK1 / 2 в экстрактах цельных клеток, полученных из спленоцитов дикого типа, PKD2 GT / GT и PKD2 SSAA / SSAA , активированных сложным эфиром форбола в течение 15 мин.Подобные результаты наблюдались в тимоцитах, активированных сложным форболовым эфиром. ( D ) Петля активации PKD и фосфорилирование Ser 916 в B-клетках дикого типа, PKD1 — / — и PKD3 — / — DT40, активированных сложным эфиром форбола в течение 15 мин. ( E ) Анализ фосфорилирования петли активации PKD в иммунопреципитатах PKD3, полученных из необработанных и активированных сложным форболом тимоцитов дикого типа и PKD2 GT / GT . ( F ) Экспрессия и каталитическая активность PKD3 в первичных лимфоидных клетках дикого типа и гомозиготных PKD2 GT и PKD2 SSAA .Белки PKD3 были иммунопреципитированы из тимоцитов, активированных сложным сложным эфиром форбола, с использованием специфических антител против PKD3 [34] до того, как каталитическая активность PKD3 была измерена в анализах in vitro пептидных субстратных киназ , как описано в разделе «Материалы и методы». Результаты представляют от четырех до шести дикого типа, PKD2 GT / GT и PKD2 SSAA / SSAA тими, проанализированы в трех отдельных экспериментах и ​​представляют собой средние значения + S.E.M. Для расчета статистической значимости использовали критерий Стьюдента t .

Паттерны экспрессии PKD1 и PKD2 у взрослых мышей

Анализ баз данных экспрессии EST (метка экспрессируемой последовательности) / гена показывает, что во многих тканях взрослого организма наблюдается коэкспрессия различных изоформ PKD на уровне мРНК (A). Однако относительная экспрессия конкретных изоформ PKD на уровне белка в различных тканях и клетках четко не определена. В контексте PKD1 и PKD2, которые являются высокогомологичными, большинство антител, генерируемых против этих киназ, не могут различать две изоформы.Например, наиболее часто используемая антисыворотка «pan’-PKD», используемая для обнаружения PKD1 в различных тканях, была направлена ​​против пептидной последовательности EEREMKALSERVSIL (соответствующей аминокислотам 904–918 в мышиной PKD1), но одинаково хорошо реагирует с PKD2. При анализе SDS / PAGE теоретически возможно различать PKD1 и PKD2 на основе тонких различий в их электрофоретической подвижности [10]. Однако, поскольку электрофоретическая подвижность изоформ PKD может быть изменена фосфорилированием белка [37], невозможно использовать дифференциальную миграцию на гелях SDS / PAGE в качестве надежного критерия для отличия экспрессии PKD1 от экспрессии PKD2.

Дифференциальная экспрессия изоформ PKD1 и PKD2 в тканях взрослых животных

( A ) Анализ экспрессии генов Prkd1 , Prkd2 и Prkd3 в тканях взрослых мышей. Данные экспрессии мРНК в наборе данных GeneAtlas MOE430 (gcrma) были загружены из портала генов BioGPS (http://www.biogps.gnf.org) и выражены как кратное изменение экспрессии в указанных тканях по сравнению с выраженным в клетках NIH 3T3. ( B ) Вестерн-блоттинг экспрессии PKD1, PKD2 и Akt в тимоцитах дикого типа по сравнению с тимоцитами PKD2 GT / GT . Блоты представляют три или более отдельных экспериментов. Молекулярные массы указаны в кДа. ( C ) Вестерн-блоттинг экспрессии PKD1, PKD2 и Akt в тканях дикого типа по сравнению с взрослыми тканями PKD2 GT / GT . Блоты получены от двух отдельных мышей PKD2 SSAA / SSAA и их однопометников дикого типа. Закрытые стрелки указывают на ПКД2; открытые стрелки указывают на ПКД1.

В этом отношении экзоны, кодирующие область белка, распознаваемого антисывороткой pan-PKD, не будут экспрессироваться у мышей PKD2 GT / GT .Соответственно, анализ вестерн-блоттинга с использованием антисыворотки к пан-PKD тканей от мышей дикого типа по сравнению с мышами PKD2 GT / GT позволит оценить, какие взрослые ткани экспрессируют PKD1 и PKD2. Вестерн-блот-анализ экстрактов лимфоидной ткани мышей PKD2 GT / GT , особенно тимуса (B), лимфатических узлов и селезенки (C), показывает, что эти ткани не содержат каких-либо белков, реагирующих с антисывороткой pan-PKD1 / 2, это указывает на то, что Т- и В-лимфоциты, которые составляют большинство клеток в этих тканях, специфически экспрессируют PKD2, но не PKD1. Напротив, делеция PKD2 вызывает небольшую потерю общего белка PKD1 / 2 в головном мозге или поджелудочной железе или не вызывает ее отсутствия, но снижает общие уровни белков PKD1 / 2 в сердце и почках (C). Следовательно, PKD1 и PKD2 коэкспрессируются во многих тканях взрослого человека, хотя и на разных уровнях, но одним исключением являются лимфоидные клетки, которые, по-видимому, экспрессируют только PKD2.

PKD2 является основной изоформой PKD, экспрессируемой в лимфоцитах мыши

Данные, предполагающие, что PKD2, но не PKD1, избирательно экспрессируется в лимфоидных клетках у взрослых мышей, были подтверждены с помощью исследований киназы in vitro , сравнивая общую каталитическую активность PKD1 / 2 в тимоцитах дикого типа и PKD2 GT / GT .Существенное фосфорилирование пептидного субстрата было обнаружено в иммунопреципитатах PKD1 / 2, полученных из тимоцитов дикого типа, активированных форболовым сложным эфиром, но не в тимоцитах, полученных из тимоцитов PKD2 GT / GT (A). Другим хорошо охарактеризованным маркером каталитической активности эндогенных PKD1 / PKD2 является статус фосфорилирования консервативного С-концевого сайта аутофосфорилирования (Ser 916 в PKD1; Ser 873 в PKD2). Как показано на (B), тимоциты дикого типа, активированные сложным форболом, но не PKD2 GT / GT , содержат активные аутофосфорилированные белки PKD1 / 2.

Мы также исследовали общую каталитическую активность PKD1 / 2 в PKD2 SSAA -кнокин-лимфоцитах. Не было потери экспрессии белка PKD2 в гомозиготных лимфоцитах PKD2 SSAA , но общая каталитическая активность PKD1 / 2 была серьезно нарушена, по оценке in vitro киназных анализов белков PKD2, иммунопреципитированных из стимулированных форболом сложным эфиром белков дикого типа по сравнению с тимоцитами PKD2 SSAA / SSAA (A). Более того, мутантные белки PKD2 SSAA не могли эффективно аутофосфорилироваться по Ser 873 в ответ на стимуляцию сложным эфиром форбола (B). Однако мы обнаружили небольшое количество остаточной каталитической активности PKD1 / 2 в активированных тимоцитах PKD2 SSAA / SSAA по сравнению с тимоцитами PKD2 GT / GT . Поскольку лимфоидные клетки не экспрессируют PKD1 (см. Выше), низкие уровни каталитической активности PKD2, очевидно, могут быть индуцированы в мутантных тимоцитах PKD2 SSAA независимо от PKC-опосредованного фосфорилирования каталитического домена PKD2.

Поразительно, мы наблюдали, что, хотя обработка сложным эфиром форбола индуцировала значительное фосфорилирование петли активации PKD в лимфоцитах дикого типа, это не было обнаружено в экстрактах цельных клеток, полученных из PKD2 SSAA / SSAA или PKD2 GT /, стимулированных сложным эфиром форбола. Лимфоциты GT , несмотря на нормальную индукцию фосфорилирования ERK1 / 2 (киназа 1/2, регулируемая внеклеточными сигналами) (C).Это было неожиданно, поскольку PKD3 экспрессируется в лимфоцитах млекопитающих [34] (E), а сегмент петли активации PKD полностью консервативен во всех трех изоформах PKD млекопитающих. Следовательно, фосфо-специфические антитела «петли активации» PKD должны одинаково перекрестно реагировать с PKD1 (фосфорилированным по Ser 744 / Ser 748 ), PKD2 (фосфорилированным по Ser 707 / Ser 711 ) и PKD3 (фосфорилированным по Ser 730 / Ser 734 ). Чтобы выяснить, действительно ли фосфо-специфическое антитело петли активации PKD может обнаруживать активные фосфорилированные белки PKD3, мы проанализировали B-лимфоциты птиц DT40, которые, как известно, экспрессируют PKD3 и PKD1 примерно на эквимолярных уровнях, но не экспрессируют PKD2 [4].Данные в (D) показывают, что делеция PKD1 в B-лимфоцитах DT40 приводит к полной потере фосфорилирования PKD1 Ser 916 , но только к 2–3-кратному снижению общих уровней фосфорилирования петли активации PKD после стимуляции сложным эфиром форбола. . Сходным образом, в клетках PKD3 — / — DT40 не было изменений в фосфорилировании PKD1 Ser 916 и снова только 2–3-кратное снижение уровней фосфорилирования петли активации PKD после стимуляции сложным эфиром форбола (D). Таким образом, фосфо-специфические антитела петли активации PKD могут очень эффективно обнаруживать активную фосфорилированную PKD3 в клетках, которые экспрессируют высокие уровни белка PKD3.Действительно, когда мы иммунопреципитировали белки PKD3 из тимоцитов PKD2 GT / GT , активированных сложным эфиром форбола, мы теперь смогли обнаружить фосфорилирование петли активации PKD3 (E). Соответственно, невозможность обнаружить какое-либо фосфорилирование петли активации PKD в экстрактах цельных клеток, полученных из мутантных лимфоцитов PKD2, свидетельствует о том, что PKD3 не вносит большого количественного вклада в общий пул белков PKD в лимфоидных клетках / тканях мыши.

Хотя экспрессия белка PKD3 очень низкая в лимфоцитах мыши, важно было оценить, повлияла ли потеря каталитической активности PKD2 на экспрессию или активность PKD3.Поэтому мы иммунопреципитировали PKD3 из контрольных и стимулированных форболовым эфиром тимоцитов дикого типа и мутантных PKD2. В этих экспериментах мы обнаружили, что уровни экспрессии PKD3 и каталитическая активность были нормальными в тимоцитах дикого типа, PKD2 GT / GT и PKD2 SSAA / SSAA (F). Таким образом, потеря экспрессии PKD2 и / или каталитической активности в лимфоидных клетках не компенсируется повышенной экспрессией / активностью других изоформ PKD. Также нет никаких доказательств того, что экспрессия каталитически неактивной PKD2 оказывает какое-либо доминантно-отрицательное влияние на экспрессию или активность PKD3.

PKD2 незаменима для развития зрелых Т-лимфоцитов

Поскольку PKD2 является основной изоформой PKD, экспрессируемой в тимусе и зрелых Т-лимфоцитах (результаты не показаны), мы спросили, важна ли каталитическая функция PKD2 для нормального T- развитие лимфоцитов. Предыдущие исследования показали, что PKD может активироваться пре-TCR в предшественниках Т-клеток в тимусе и комплексом зрелых α / β TCR в периферических Т-клетках [30,33]. На сегодняшний день в экспериментах по изучению последствий активности PKD для функции TCR использовались методы трансгенеза для нацеливания активированного мутантного белка PKD (включающего каталитический домен PKD1) либо в мембрану, либо в цитозоль пре-Т-клеток. Эти эксперименты демонстрируют, что конститутивно активная передача сигналов PKD может заменять пре-TCR, чтобы управлять пролиферацией и дифференцировкой Т-клеток у мышей с нулевым геном рекомбиназы [30]. Однако эксперименты с такими мутантами с усилением функции могут дать информацию о функциональной способности протеинкиназы, но они не оценивают, важна ли киназа для конкретного биологического процесса.

Поэтому мы исследовали развитие Т-клеток у мышей PKD2 GT / GT и PKD2 SSAA / SSAA , используя проточную цитометрию для определения основных субпопуляций тимуса и периферических Т-клеток.Ранние предшественники Т-лимфоцитов в тимусе являются DN корецепторов MHC CD4 и CD8. Эти предшественники DN претерпевают перестройки локуса TCRβ с образованием полипептида TCRβ, который обеспечивает экспрессию комплекса пре-TCR на клеточной поверхности. Затем пре-TCR поддерживает выживание и быстрое клональное размножение предшественников DN вместе с их дифференцировкой в ​​тимоциты CD4 + CD8 + DP. Затем происходят перестройки генов цепи TCR, и клетки, которые экспрессируют функциональный, но не самореактивный комплекс α / β TCR, дифференцируются либо в CD4 + , либо в CD8 + SP Т-лимфоциты.Thymi от мышей PKD2 SSAA / SSAA и PKD2 GT / GT не обнаруживали каких-либо явных отклонений и содержали нормальное количество тимоцитов DN, DP и зрелых SP, которые экспрессируют высокие уровни зрелого комплекса α / β TCR (A и B ). Более того, эти зрелые тимоциты SP были способны выходить из тимуса и нормально заселять периферические ткани, поскольку частота и общее количество периферических Т-лимфоцитов CD4 + и CD8 + в лимфатических узлах и селезенке дикого типа, PKD2 Мыши SSAA / SSAA и PKD2 GT / GT были сопоставимы (C и D, результаты не показаны).Аналогичным образом, развитие B-лимфоцитов в костном мозге происходило нормально в отсутствие каталитической активности PKD2 (результаты не показаны), что приводило к нормальному общему количеству зрелых IgM / IgD-экспрессирующих B-лимфоцитов в селезенках и лимфатических узлах PKD2 SSAA / SSAA и PKD2 GT / GT мышей (C и D, результаты не показаны). Таким образом, активность киназы PKD2 необходима для нормального развития зрелых периферических Т- и В-лимфоцитов.

PKD2 необходим для развития зрелых T- и B-лимфоцитов

Экспрессия CD4 / CD8 DP и SP субпопуляций в тимусе дикого типа по сравнению с PKD2 GT / GT ( A ) или по сравнению с диким типом с мышами PKD2 SSAA / SSAA ( B ).Анализ субпопуляций периферических Т-клеток (TCRβ + CD4 + и TCRβ + CD8 + ) и B-клеток (B220 + IgM lo / + IgD lo / + ) в селезенке от мышей дикого типа по сравнению с PKD2 GT / GT ( C ) или дикого типа по сравнению с мышами PKD2 SSAA / SSAA ( D ). Ткани мышей с мутантом PKD2 и контрольных однопометников дикого типа собирали через 8–12 недель, окрашивали специфическими антителами и анализировали проточной цитометрией, как описано в разделе «Материалы и методы». Результаты — это средние значения + S.E.M. ( n, ≥ 7 мышей).

Каталитическая активность PKD2 важна для зрелых периферических Т-лимфоцитов

Следующий вопрос, который был задан, заключался в том, играет ли PKD2 какую-либо роль в периферических Т-клетках. Как показано на (A), взаимодействие TCR вызывает устойчивое и устойчивое фосфорилирование PKD2 на Ser 707 / Ser 711 и, соответственно, увеличивает каталитическую активность PKD2, что приводит к усилению аутофосфорилирования на Ser 873 . Хорошо известно, что фосфорилирование Ser 707 / Ser 711 в каталитическом домене PKD2 опосредуется PKC [36].В этом контексте изоформы PKC, которые участвуют в регуляции фосфорилирования петли активации PKD и активации в ответ на лигирование рецептора антигена, включают PKCδ в B-лимфоцитах [38] и избыточную роль PKCα и PKCθ в T-лимфоцитах (G. Байер, личное сообщение). Также известно, что ферменты PKC играют ключевую роль в Т-лимфоцитах в контроле экспрессии генов цитокинов в клетках, запускаемых TCR [39–41]. Также сообщалось, что PKD2 может активировать репортерные конструкции для цитокина IL-2 в лейкемической Т-клеточной линии Jurkat [42].Поэтому мы спросили, требуется ли каталитическая активность PKD2 для поддержки нормальных реакций активации лимфоцитов.

Каталитическая активность PKD2 важна для функции периферических Т-лимфоцитов.

( A ) Наивные Т-клетки CD8 + были очищены из трансгенных клеток лимфатических узлов OTI-TCR и стимулированы in vitro специфическим пептидом OVA. В разные моменты времени клетки лизировали, а фосфорилирование и экспрессию белка оценивали с помощью вестерн-блоттинга.( B ) Наивные Т-клетки CD4 + и CD8 + очищали отдельно от лимфатических узлов дикого типа, PKD2 SSAA / SSAA и PKD2 GT / GT и стимулировали in vitro через TCR в течение 18 часов с увеличением концентрации моноклонального антитела против CD3ϵ. Уровни IL-2 и IFNγ в супернатанте культуры определяли с помощью ELISA. Результаты — это средние значения + S.E.M. для трех образцов и являются репрезентативными для двух отдельных экспериментов.

Сначала мы сравнили пролиферативные ответы лимфоцитов дикого типа и PKD2 SSAA / SSAA лимфоцитов.Однако мы не наблюдали значительных различий в пролиферативной способности мутантных лимфоцитов PKD2 по сравнению с контролем дикого типа после стимуляции in vitro TCR (результаты не показаны). Однако поразительно, что способность Т-клеток CD4 + и CD8 + продуцировать эффекторные цитокины IL-2 и IFNγ была сильно ослаблена в T-лимфоцитах PKD2 SSAA / SSAA , которые стимулировались in vitro через TCR (B). Таким образом, каталитическая активность PKD2 необходима для эффективного индуцированного рецептором антигена продукции цитокинов в зрелых периферических Т-лимфоцитах.

Мы дополнительно исследовали функцию in vivo каталитической активности PKD2, изучая способность мышей, мутантных по PKD2, вызывать иммунный ответ на модельный антиген. Мы иммунизировали контрольных мышей и мышей PKD2 SSAA / SSAA NP-OVA, антигеном, который вызывает продукцию антител Т-клеточно-зависимым образом. В разные моменты времени после иммунизации уровни антигенспецифических Ig в сыворотке определяли с помощью ELISA. Как показано на (A), исходные сывороточные титры Ig были нормальными у мышей PKD2 SSAA / SSAA .Однако мыши PKD2 SSAA / SSAA показали пониженные антиген-специфические ответы IgM и IgG 1 по сравнению с ответами мышей дикого типа (B). Таким образом, каталитическая активность PKD2 важна для оптимальных зависимых от Т-клеток ответов антител in vivo .

Каталитическая активность PKD2 важна для эффективных гуморальных иммунных ответов против Т-клеточно-зависимых антигенов.

( A ) ELISA базальных уровней сывороточного Ig у контрольных мышей и мышей PKD2 SSAA -knockin.Результаты представляют собой средние значения ± S.E.M. ( n = 4 мыши на генотип). ( B ) PKD2 SSAA / SSAA и PKD2 Мышей WT / WT иммунизировали NP-OVA в день 0. Уровни сывороточных анти-NP IgM и IgG 1 определяли на 8, 14 и 29 дни после иммунизация методом ELISA серийных разведений сыворотки. Результаты представляют собой средние значения ± S.E.M. ( n = 4 мыши на генотип). Статистическая значимость рассчитывалась с помощью двухфакторного дисперсионного анализа. P = 0,001 и P = 0,081 для уровней NP-специфического IgM и NP-специфического IgG 1 соответственно.Результаты представляют два независимых эксперимента.

ОБСУЖДЕНИЕ

Для изучения роли PKD1 и PKD2 in vivo мы получили мышей, у которых аллели PKD1 и PKD2 дикого типа были заменены мутантами с заменами аланина для Ser 744 / Ser 748 и Ser 707 / Ser 711 соответственно. Эти сериновые остатки расположены в каталитических доменах PKD, и исследований in vitro показали, что они фосфорилируются классическими / новыми изоформами PKC, тем самым активируя каталитическую активность PKD [36,43]. Важность этих событий фосфорилирования для регуляции PKD in vivo не была известна. Однако неспособность мутанта PKD1 SSAA / SSAA поддерживать развитие эмбриона теперь показывает, что фосфорирование Ser 744 / Ser 748 важно для функции PKD1 in vivo . Данные также показывают, что изоформы PKD1 и PKD2 обладают уникальными функциями in vivo : потеря экспрессии PKD1 [24] или каталитической функции (настоящее исследование) приводит к ранней эмбриональной летальности.Напротив, потеря экспрессии PKD2 или каталитической функции in vivo не влияет на нормальное эмбриональное развитие. Более того, взрослые мыши, у которых аллели PKD2 дикого типа удалены или заменены каталитически неактивными мутантами PKD2, являются жизнеспособными и фертильными.

Основной целью настоящего исследования было выяснить, есть ли какая-то уникальная роль PKD2 in vivo . Поразительным открытием настоящего исследования является наше открытие, что PKD2 является основной изоформой PKD, экспрессируемой в Т- и В-лимфоцитах мышей; PKD1 не экспрессируется в этих клетках, тогда как PKD3, по-видимому, экспрессируется только на очень низких уровнях в первичных лимфоидных клетках мыши. Более того, каталитическая активность PKD2 была важна для продукции эффекторных цитокинов после вовлечения TCR. PKD2 также важен для оптимальной индукции ответа антител на модельный антиген. Таким образом, PKD2 играет уникальную роль у взрослых мышей в контроле функции лимфоидных клеток.

PKD являются высококонсервативными ферментами, но эволюция множества изоформ, по-видимому, связана с эволюцией позвоночных, следовательно, амфибии, рыбы и птицы экспрессируют две изоформы PKD, тогда как млекопитающие экспрессируют три члена семейства PKD.PKD беспозвоночных, обнаруженная у Drosophila , наиболее близко гомологична изоформе PKD3 млекопитающих; вторая изоформа PKD, обнаруженная у рыб и земноводных, наиболее похожа на PKD1; напротив, PKD2, по-видимому, эволюционировал у млекопитающих. Настоящие данные показывают, что существует дифференциальная экспрессия изоформ PKD в различных тканях, в частности уникальная экспрессия PKD2 в первичных и вторичных лимфоидных тканях. Какие именно клеточные механизмы контролируют уровни дифференциальной экспрессии различных изоформ PKD в разных тканях и на разных стадиях развития, остается неясным. Почему лимфоциты будут экспрессировать PKD2, а не PKD1, если они обладают общей субстратной специфичностью и регулируются идентичными внутриклеточными механизмами передачи сигналов, также неясно. Тем не менее, неспособность Т-клеток экспрессировать PKD1 позволяет PKD2 играть уникальную неизбыточную роль в Т-клетках, опосредуя индуцированную TCR продукцию основных цитокинов IL-2 и IFNγ.

Индукция продукции IL-2 и IFNγ в ответ на вовлечение TCR опосредуется сигнальными путями DAG и PKC, особенно PKCα и PKCθ [39–41]. Исследования in vitro также показали, что несколько различных изоформ PKC могут фосфорилировать Ser 707 и Ser 711 в PKD2, тем самым активируя киназу [36], но важность этого пути для регуляции PKD in vivo не была ранее известный. Неспособность Т-лимфоцитов PKD2 SSAA / SSAA эффективно продуцировать IL-2 и IFNγ, таким образом, показывает, что PKD функционирует ниже PKC, чтобы контролировать продукцию цитокинов в Т-клетках. Цитокины IL-2 и IFNγ играют решающую роль в адаптивных иммунных ответах, и, таким образом, настоящее исследование также предоставляет доказательства того, что PKD2 играет уникальную неизбыточную роль в контроле функций Т-клеток во время адаптивных иммунных ответов.Роль PKD2 в адаптивных иммунных ответах млекопитающих интригует, потому что DKF-2, PKD Caenorhabditis elegans, действует ниже DAG и PKC, чтобы регулировать врожденный иммунитет у нематод [44]. Следовательно, участие PKD в механизмах, контролирующих иммунные ответы, является консервативным.

Таким образом, наши данные in vivo подтверждают функциональную важность PKC-опосредованных сайтов фосфорилирования серина, расположенных в каталитическом домене PKD, для активации PKD1 и PKD2 и последующей передачи сигналов.Они также предоставляют дополнительные доказательства того, что изоформы PKD могут действовать как нижестоящие эффекторы DAG-регулируемых ферментов PKC in vivo .

ВКЛАД АВТОРА

Шэрон Мэтьюз, Мария Наварро, Линда Синклер, Элизабет Эмсли и Кармен Фейжу-Карнеро провели эксперименты; Шэрон Мэтьюз, Мария Наварро и Дорин Кантрелл разработали эксперименты и проанализировали результаты; Газету написали Шэрон Мэтьюз и Дорин Кантрелл.

БЛАГОДАРНОСТИ

Мы благодарим сотрудников отдела ресурсов биологических служб за заботу о мышах и сотрудников лаборатории Кантрелла за критическое прочтение статьи.

ФИНАНСИРОВАНИЕ

Этот проект был поддержан стипендией Wellcome Trust (в округе Колумбия) и грантом программы [номер гранта 065975 / Z / 01 / A].

Ссылки

1. Розенгурт Э., Рей О., Уолдрон Р. Т. Передача сигналов протеинкиназы D. J. Biol. Chem. 2005; 280: 13205–13208. [PubMed] [Google Scholar] 2. Спиталер М., Эмсли Э., Вуд С. Д., Кантрелл Д. Локализация диацилглицерина и протеинкиназы D во время активации Т-лимфоцитов. Иммунитет. 2006; 24: 535–546. [PubMed] [Google Scholar] 3.Мэтьюз С. А., Иглесиас Т., Розенгурт Э., Кантрелл Д. Пространственная и временная регуляция протеинкиназы D (PKD) EMBO J. 2000; 19: 2935–2945. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 4. Мэтьюз С. А., Лю П., Спиталер М., Олсон Э. Н., МакКинси Т. А., Кантрелл Д. А., Шаренберг А. М. Важная роль киназ семейства протеинкиназ D в регуляции класса II гистоновые деацетилазы в В-лимфоцитах. Мол. Клетка. Биол. 2006; 26: 1569–1577. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 5. Боссард К., Брессон Д., Полищук Р. С., Мальхотра В. Димерная PKD регулирует деление мембраны с образованием транспортных носителей в TGN. J. Cell Biol. 2007; 179: 1123–1131. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 6. Ли Дж., О’Коннор К. Л., Хеллмич М. Р., Грили Г. Х., младший, Таунсенд К. М., младший, Эверс Б. М. Роль протеинкиназы D в опосредованной секреции нейротензина протеинкиназой C-α / -δ и киназой Rho / Rho. J. Biol. Chem. 2004. 279: 28466–28474. [PubMed] [Google Scholar] 7. фон Вихерт Г., Эденфельд Т., фон Блюм Дж., Krisp H., Krndija D., Schmid H., Oswald F., Lother U., Walther P., Adler G., Seufferlein T. Протеинкиназа D2 регулирует секрецию хромогранина A в нейроэндокринных опухолевых клетках BON человека. Клетка. Сигнализация. 2008; 20: 925–934. [PubMed] [Google Scholar] 8. Йеман К., Аяла М. И., Райт Дж. Р., Бард Ф., Боссард К., Анг А., Маеда Ю., Сеуферлейн Т., Меллман И., Нельсон В. Дж., Малхотра В. Протеин киназа D регулирует выход белков базолатеральной мембраны из транс -сети Гольджи. Nat. Cell Biol. 2004. 6: 106–112.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 9. Ли Дж., Чен Л. А., Таунсенд С. М., младший, Эверс Б. М. PKD1, PKD2 и их субстрат Kidins220 регулируют секрецию нейротензина в линии эндокринных клеток человека BON. J. Biol. Chem. 2008. 283: 2614–2621. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 10. Михайлович Т., Маркс М., Ауэр А., Ван Линт Дж., Шмид М., Вебер С., Зеуферлейн Т. Протеинкиназа D2 опосредует активацию ядерного фактора κB с помощью Bcr-Abl в Bcr-Abl + миелоиде человека лейкозные клетки. Cancer Res.2004. 64: 8939–8944. [PubMed] [Google Scholar] 11. Сторц П., Допплер Х., Токер А. Протеинкиназа Cδ селективно регулирует протеинкиназу D-зависимую активацию NF-κB при передаче сигналов окислительного стресса. Мол. Клетка. Биол. 2004. 24: 2614–2626. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 13. Steiner T. S., Ivison S. M., Yao Y., Kifayet A. Протеинкиназы D1 и D2 участвуют в высвобождении хемокинов, индуцированном Toll-подобными рецепторами 2, 4 и 5. Cell. Иммунол. 2010. 264: 135–142. [PubMed] [Google Scholar] 14. Фугманн Т., Hausser A., ​​Schoffler P., Schmid S., Pfizenmaier K., Olayioye M. A. Регулирование секреторного транспорта с помощью протеинкиназы D-опосредованного фосфорилирования белка-переносчика церамидов. J. Cell Biol. 2007; 178: 15–22. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 15. Watkins J. L., Lewandowski K. T., Meek S. E., Storz P., Toker A., ​​Piwnica-Worms H. Фосфорилирование киназы полярности Par-1 протеинкиназой D регулирует связывание 14-3-3. и мембранная ассоциация. Proc. Natl. Акад. Sci. США, 2008 г .; 105: 18378–18383.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 16. Динг Г., Сонода Х., Ю. Х., Каджимото Т., Гопараджу С. К., Джаханжеер С., Окада Т., Накамура С. Фосфорилирование, опосредованное протеинкиназой D, и ядерный экспорт сфингозинкиназы 2. J. Biol. . Chem. 2007. 282: 27493–27502. [PubMed] [Google Scholar] 17. Лю П., Шаренберг А. М., Кантрелл Д. А., Мэтьюз С. А. Ферменты протеинкиназы D незаменимы для пролиферации, выживания и регулируемой антигенным рецептором активности NFκB в В-клетках позвоночных. FEBS Lett. 2007. 581: 1377–1382.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 18. Юань Дж., Розенгурт Е. PKD, PKD2 и p38 MAPK опосредуют фосфорилирование серина-82 Hsp27, индуцированное нейротензином в клетках PANC-1 рака поджелудочной железы. J. Cell. Biochem. 2008. 103: 648–662. [PubMed] [Google Scholar] 19. Hausser A., ​​Storz P., Martens S., Link G., Toker A., ​​Pfizenmaier K. Протеинкиназа D регулирует везикулярный транспорт путем фосфорилирования и активации фосфатидилинозитол-4-киназы IIIβ в комплексе Гольджи. Nat. Cell Biol. 2005; 7: 880–886. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 20.Остер Х., Абрахам Д., Лейтджес М. Экспрессия семейства протеинкиназ D (PKD) во время эмбриогенеза мыши. Паттерны экспрессии генов. 2006. 6: 400–408. [PubMed] [Google Scholar] 21. Sumara G., Formentini I., Collins S., Sumara I., Windak R., Bodenmiller B., Ramracheya R., Caille D., Jiang H., Platt K. A., et al. Регулирование PKD с помощью MAPK p38δ в секреции инсулина и гомеостазе глюкозы. Клетка. 2009. 136: 235–248. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 22. Park J. E., Kim Y. I., Yi A. K. Протеинкиназа D1 важна для MyD88-зависимого пути передачи сигналов TLR.J. Immunol. 2009. 182: 6316–6327. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 23. Джадали А., Газизаде С. Протеинкиназа D участвует в обратимой приверженности дифференцировке в первичных культурах кератиноцитов мышей. J. Biol. Chem. 2010; 285: 23387–23397. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 24. Fielitz J., Kim M. S., Shelton J. M., Qi X., Hill J. A., Richardson J. A., Bassel-Duby R., Olson E. N. Потребность протеинкиназы D1 в патологических ремоделирование сердца. Proc. Natl. Акад.Sci. США, 2008 г .; 105: 3059–3063. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 25. Ван К. Дж. PKD на перекрестке передачи сигналов DAG и PKC. Trends Pharmacol. Sci. 2006. 27: 317–323. [PubMed] [Google Scholar] 26. Рей О., Юань Дж., Янг С. Х., Розенгурт Э. Протеинкиназа Cν / протеинкиназа D 3 ядерная локализация, каталитическая активация и внутриклеточное перераспределение в ответ на агонисты рецепторов, связанных с G-белками. J. Biol. Chem. 2003; 278: 23773–23785. [PubMed] [Google Scholar] 27. Оанча Э., Мейер Т. Протеинкиназа C как молекулярная машина для декодирования сигналов кальция и диацилглицерина. Клетка. 1998. 95: 307–318. [PubMed] [Google Scholar] 28. Рей О., Синнет-Смит Дж., Жукова Е., Розенгурт Е. Регулируемый ядерно-цитоплазматический транспорт протеинкиназы D в ответ на активацию рецептора, сопряженного с G-белком. J. Biol. Chem. 2001; 276: 49228–49235. [PubMed] [Google Scholar] 29. Сторц П., Допплер Х., Токер А. Протеинкиназа D обеспечивает передачу сигналов от митохондрий к ядру и детоксикацию от активных форм кислорода митохондрий.Мол. Клетка. Биол. 2005. 25: 8520–8530. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 30. Марклунд У., Лайтфут К., Кантрелл Д. Внутриклеточное расположение и контекстно-зависимая функция протеинкиназы D. Иммунитет. 2003; 19: 491–501. [PubMed] [Google Scholar] 31. Хао К., Ван Л., Чжао З. Дж., Тан Х. Идентификация протеинкиназы D2 как основного регулятора пролиферации, миграции и ангиогенеза эндотелиальных клеток. J. Biol. Chem. 2009. 284: 799–806. [PubMed] [Google Scholar] 32. Тан М., Хао Ф., Сюй X., Chisolm G. M., Cui M. Z. Лизофосфатидилхолин активирует новый PKD2-опосредованный сигнальный путь, который контролирует миграцию моноцитов. Артериосклер. Тромб. Васк. Биол. 2009. 29: 1376–1382. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 33. Ван Линт Дж. В., Синнет-Смит Дж., Розенгурт Э. Экспрессия и характеристика PKD, сложного эфира форбола и сериновой протеинкиназы, стимулированной диацилглицерином. J. Biol. Chem. 1995; 270: 1455–1461. [PubMed] [Google Scholar] 34. Мэтьюз С. А., Дайалу Р., Томпсон Л. Дж., Шаренберг А.М. Регулирование протеинкиназы Cν рецептором B-клеточного антигена. J. Biol. Chem. 2003; 278: 9086–9091. [PubMed] [Google Scholar] 35. Мэтьюз С. А., Розенгурт Э., Кантрелл Д. Протеинкиназа D: селективная мишень для рецепторов антигена и последующая мишень для протеинкиназы С в лимфоцитах. J. Exp. Med. 2000; 191: 2075–2082. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 36. Стурани С., Ван Линт Дж., Гилкрист А., Ванденхид Дж. Р., Адлер Г., Сеуферлейн Т. Механизм активации протеинкиназы D2 (PKD2) рецептором CCK B / гастрина.J. Biol. Chem. 2002; 277: 29431–29436. [PubMed] [Google Scholar] 37. Мэтьюз С. А., Розенгурт Э., Кантрелл Д. Характеристика серина 916 как сайта аутофосфорилирования in vivo для протеинкиназы D / протеинкиназы Cμ J. Biol. Chem. 1999; 274: 26543–26549. [PubMed] [Google Scholar] 38. Pracht C., Minguet S., Leitges M., Reth M., Huber M. Ассоциация протеинкиназы C с рецепторным комплексом B-клеточного антигена. Клетка. Сигнализация. 2006; 19: 715–722. [PubMed] [Google Scholar] 39. Пфайфхофер К., Kofler K., Gruber T., Tabrizi N.G., Lutz C., Maly K., Leitges M., Baier G. Протеинкиназа Cθ влияет на мобилизацию Ca 2+ и активацию клеток NFAT в первичных Т-клетках мыши. J. Exp. Med. 2003; 197: 1525–1535. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 40. Pfeifhofer C., Gruber T., Letschka T., Thuille N., Lutz-Nicoladoni C., Hermann-Kleiter N., Braun U., Leitges M., Baier G. Дефектное переключение классов IgG2a / 2b в PKCα / — мышей. J. Immunol. 2006; 176: 6004–6011.[PubMed] [Google Scholar] 41. Gruber T., Hermann-Kleiter N., Pfeifhofer-Obermair C., Lutz-Nicoladoni C., Thuille N., Letschka T., Barsig J., Baudler M., Li J., Metzler B., et al. PKCθ взаимодействует с PKCα в аллоиммунных ответах Т-клеток in vivo . Мол. Иммунол. 2009; 46: 2071–2079. [PubMed] [Google Scholar] 42. Ири А., Харада К., Цукамото Х., Ким Дж. Р., Араки Н., Нишимура Ю. Протеинкиназа D2 участвует либо в регуляции промотора IL-2, либо в индукции гибели клеток при стимуляции TCR в зависимости от его активности в Jurkat клетки.Int. Иммунол. 2006; 18: 1737–1747. [PubMed] [Google Scholar] 43. Иглесиас Т., Уолдрон Р. Т., Розенгурт Э. Идентификация in vivo сайтов фосфорилирования, необходимых для активации протеинкиназы D. J. Biol. Chem. 1998. 273: 27662–27667. [PubMed] [Google Scholar] 44. Ren M., Feng H., Fu Y., Land M., Rubin C.S. Протеинкиназа D является важным регулятором врожденного иммунитета C. elegans . Иммунитет. 2009. 30: 521–532. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

Комбинированные услуги — Австралийская ассоциация спортивных стрелков (Квинсленд)

КЛАССИЧЕСКОЕ, а не пластиковое — вот что привлекает в соревнованиях SSAA Queensland’s Combined Services, где стрелки могут достать оружие прошлых лет и участвовать в соревнованиях по стрельбе по мишеням.

Будь то легендарная винтовка SMLE Mk III * .303, которую Австралия и Британская империя пережили две мировые войны, шведские винтовки Маузер M96 или M38, ценимые за их точность, прочная винтовка Мосина-Нагана M91 / 30, которая использовалась Советским Союзом во время Вторая мировая война или даже однозарядная учебная винтовка 22-го калибра — все они приветствуются на матче Объединенной службы.

Ключевым компонентом соревнования является матч с тремя позициями (3P) Core, который включает в себя поражение целей на дистанциях 100, 200 и 300 ярдов соответственно, переключаясь между положениями стоя, с колена и лежа.

Другие матчи, снятые в рамках соревнований по комбинированным видам обслуживания, включают в себя умышленное возгорание на дистанции 300 м (только прицельные приспособления!), Соревнования по скоростной стрельбе и соревнования «Действие M», которые включают смену позиций несколько раз во время каждого боя.

В то время как винтовки со скользящим затвором времен Первой и Второй мировых войн, безусловно, являются наиболее часто встречающимся огнестрельным оружием в соревнованиях комбинированных видов вооружений, существуют категории мушкетов, оружия с черным порохом, закаленных или модифицированных винтовок и даже современной полиции. военные и тактические винтовки с оптическим прицелом.

У снайперских винтовок

Vintage также есть свое собственное событие, как и у их современных аналогов.

По общему правилу, огнестрельное оружие должно быть либо «в том виде, в каком оно было выпущено», либо должно быть точным воспроизведением, причем спортивное, улучшенное или модифицированное огнестрельное оружие должно относиться к отдельным категориям выпущенного огнестрельного оружия.

Дисциплина комбинированной службы — это не только длинное оружие, пистолеты также являются важным элементом соревнований.

Пистолеты делятся на пять классов:

  • Class One (Военный выпуск)
  • Второй класс (вопрос полиции)
  • Класс третий (модифицированные / улучшенные пистолеты первого или второго класса)
  • Четвертый класс (версии пистолетов с кольцевым воспламенением первого, двух или трех классов)
  • Class Five (военные пистолеты с черным порохом)

Полный список разрешенных пистолетов можно найти здесь.

Несколько отделений SSAA по всему штату проводят соревнования по комбинированным видам спорта, и это одна из самых популярных дисциплин для стрелков всех возрастов.

Государственные титулы проводятся ежегодно, обычно в течение долгих выходных, и всегда есть увлекательное множество старинного огнестрельного оружия, которое попадает на линию огня и по-прежнему действует так же точно, как и при первом выпуске — в некоторых случаях более чем век назад.

Комбинированный CSD | silverdalepistolclub

Комбинированные услуги

Комбинированная дисциплина стрельбы из винтовки и пистолета, направленная на поощрение организованной соревновательной стрельбы с целью улучшения знаний о безопасном обращении и надлежащем уходе за военным или служебным огнестрельным оружием.Дисциплина включает в себя более десятка классов служебной винтовки и служебного пистолета, в которых участники используют оригинальные или точные репродукции винтовок с кольцевым воспламенением, центрального огня и черного пороха, а также военные и другие служебные винтовки, карабины, револьверы и самозарядные пистолеты, стреляющие по бумажным мишеням разных размеров и с разных расстояний и позиций.

Основной матч из пистолета — это стрельба из 36 раундов на 3 дистанции. В своде правил есть несколько дополнительных матчей, самый большой из них имеет те же правила и курс стрельбы, что и из обычного служебного пистолета.

Пистолет классов

Пистолеты

должны соответствовать государственному законодательству об огнестрельном оружии для государства проживания участника, который также должен иметь соответствующую лицензию на огнестрельное оружие и регистрацию. 3-позиционное базовое совпадение используется для получения оценки участника. Книга правил содержит множество различных матчей для пистолета, некоторые из которых оцениваются как оцененные, а остальные считаются открытыми.

Пистолеты

, используемые в соревнованиях по стрельбе из комбинированного оружия, должны относиться к одному из следующих классов.

Класс 1

Пистолеты

класса 1 (оборонные) включают оригинальные или точные репродукции служебных пистолетов центрального огня с измененной длиной ствола или калибром только в соответствии с национальными законами и законами штата. Участники могут использовать револьверы или самозарядные пистолеты, которые регулярно выдаются в армию, флот или военно-воздушные силы.

Класс 2

Пистолеты

класса 2 (для правоохранительных органов / полиции) включают в себя оригинальные или точные репродукции служебных пистолетов для центрового огня с измененной длиной ствола или калибром только в соответствии с национальными законами и законами штата.Участники могут использовать револьверы или самозарядные пистолеты, которые являются или были предметом обсуждения для оборонных или правоохранительных организаций. Пистолет класса 1 не может считаться пистолетом класса 2.

Класс 3

Пистолеты

класса 3 (уточненные / модифицированные / прицельные) включают любой служебный пистолет класса 1 или 2 с центральным огнем или его точную копию, которая была изменена по сравнению с исходной спецификацией, либо после производства, либо на заводе, и может иметь регулируемую прицельную стрельбу. прицельные приспособления, рукоятки, изготовленные вручную, стволы, спусковые механизмы, спусковые крючки или компенсаторы.

Класс 4

К пистолетам

класса 4 (с кольцевым воспламенением) относятся любые пистолеты с кольцевым воспламенением, которые в значительной степени воспроизводят функции пистолетов класса 1, 2 или 3.

Класс 5

Пистолеты

lass 5 (Black Powder) включают любой оригинальный выпуск или точную копию военного пистолета с черным порохом, будь то револьвер или однозарядный пистолет, который в основном использовался в армии, флоте, полиции или военизированных силах.

Мишени

Мишени, используемые в соревнованиях по стрельбе из винтовки, включают стандартную мишень SSAA 1200 x 1200 мм для военной / служебной винтовки (Core Target), которая имеет большую черную точку прицеливания.Была разработана мини-мишень Core Target размером 600×600 мм, которая доступна для определенных матчей, но также может использоваться для моделирования больших расстояний на дистанциях с ограничениями по дальности. Подсчет баллов осуществляется по целевому значению, при этом центральная буква «V» используется для определения равных баллов. Выстрел, касающийся линии, оценивается выше.

Мишени, используемые в соревнованиях по стрельбе из пистолета, включают военную мишень для пистолета SSAA 2001. Подсчет очков осуществляется по целевому значению, а центральный значок «X» используется для определения равного счета.Еще раз, выстрел, который касается линии, оценивается по более высокому значению.

Боеприпасы

Combined Services разрешает использование любых боеприпасов, разрешенных законом и одобренных для использования на данном конкретном полигоне. Во время соревнований должны использоваться одинаковые боеприпасы, тип и зарядка. Дух и цель этой дисциплины воплощены в использовании стандартных нагрузок военного назначения. Например, если пистолет имеет маркировку .357, то необходимо использовать патроны .357.Это обеспечивает полную отдачу такого огнестрельного оружия и восстановление прицеливания для последовательных выстрелов.

Пистолетные снаряды могут быть из свинцового сплава с круглым носом, полусвязывающими пулями из свинцового сплава или боеприпасами с рубашкой, в зависимости от разрешенных диапазонов. Зарядные устройства или заряженные магазины могут использоваться на огневой позиции во время соревнований, если это разрешено конкретными правилами матча.

Другая информация о пистолете

Комбинированный пистолет для соревнований разрешает использование пистолета с усилием спускового крючка не менее 1.36кг. Обе ступени спускового крючка двойного действия на револьверах должны соответствовать обеим ступеням. Используемые кобуры должны быть практичными, безопасными, исправными и подходящими для пистолета. В дополнительных соревнованиях, когда требуется вытаскивать из кобуры, стрелок должен иметь квалификацию своего штата или территории, а кобура должна быть такого типа, который закрывает спусковой крючок. Использование перчаток или рукавиц запрещено, за исключением случаев, когда это необходимо по медицинским показаниям. Использование оптических средств, таких как телескопические прицелы, прицелы с красной точкой и оптические прицелы, зрительные трубы или бинокли, во время соревнований запрещено, за исключением случаев, когда они находятся под руководством назначенного официального лица для проверки цели.Стрелку запрещается использовать или носить какие-либо оптические приспособления или устройства любого типа, которые предоставляют ему несправедливое преимущество.

Main Match 3 Range Core Event

25 ярдов (12 выстрелов)

6 выстрелов стоя без опоры за 30 секунд

6 выстрелов сидя без опоры за 30 секунд

10 ярдов (12 выстрелов)

6 выстрелов стоя без поддержки Strong Hand всего за 20 секунд

6 выстрелов Положение на коленях без опоры за 20 секунд

7 ярдов (10 ударов)

  • Две серии по шесть выстрелов.

  • 6 выстрелов стоя без опоры за 5 секунд

  • 6 выстрелов Сильная рука без опоры на коленях всего за 10 секунд

Класс 353–360 Великий магистр

340-352 Мастер

320-339 А Марка

300-319 B Марка

299> Класс C

MATCH 12 — 90 раундов, матч

50 ярдов (24 выстрела)

6 выстрелов лежа в мишень 1 — перезарядка

6 выстрелов сидя или на коленях по мишени 2 — перезарядка

6 выстрелов с правой стороны баррикады по цели 3 — перезарядка

6 выстрелов Левая сторона баррикады на мишени 4

25 ярдов (36 выстрелов)

6 выстрелов с правой стороны баррикады по мишени 4 за 15 секунд

6 выстрелов с левой стороны баррикады по мишени 3 за 15 секунд

6 выстрелов Левая сторона баррикады Цель 1 — перезарядка — 6 выстрелов Правая сторона баррикады за 35 секунд

3 выстрела Цель 1 — 3 выстрела Цель 2 за 6 секунд

2 выстрела Мишень 2-2 выстрела Мишень 3-2 выстрела Мишень 4 за 6 секунд

10 ярдов (18 ударов)

6 выстрелов Цель 4 за 4 секунды

3 выстрела Только левой рукой — 3 выстрела Только правой рукой Цель 3 за 8 секунд

3 выстрела Цель 2 — 3 выстрела Цель 1 за 4 секунды

7 ярдов (12 ударов)

  • Одна серия из 12 выстрелов общей продолжительностью 25 секунд — «незрячая» серия (пистолет должен держаться ниже уровня плеча)

  • 6 выстрелов в створ 1 — перезарядка — 6 выстрелов в створ 2

Комбинированные услуги | SSAWA

Combined Services — это винтовка и
дисциплина стрельбы из пистолета, направленная на поощрение организованных соревнований
стрельба с целью лучшего знания безопасного обращения и правильного
уход за боевым или служебным огнестрельным оружием.Дисциплина охватывает больше, чем
дюжина классов служебных винтовок и служебных пистолетов, в которых участники используют
оригинальная или точная копия Rimfire, Centrefire и Black Powder Military
и другие служебные винтовки, карабины, револьверы и самозарядные пистолеты стреляют
для очков по бумажным мишеням разного размера и с разного расстояния и
позиции.

Видео о комбинированных услугах здесь

Целью «Комбинированных услуг» является поощрение организованной стрельбы на соревнованиях с целью улучшения знаний о безопасном обращении и надлежащем уходе за служебным огнестрельным оружием.Цель состоит в том, чтобы позволить любому довольно дешево заняться спортом и соревноваться на равных.

Классы винтовок

Стандартные военные винтовки являются обычным делом в этих соревнованиях, а 3-позиционное ядро ​​(на основании которого определяется оценка участника) является основным выстрелом в соревнованиях. Самыми популярными винтовками, используемыми на соревнованиях, являются SMLE и шведские Mausers, также используются P14, M17 и K98.

Список событий был добавлен в последние годы, и популярность использования этого огнестрельного оружия возросла, скорее всего, из-за более низкой стоимости боеприпасов и проблемы использования малокалиберного огнестрельного оружия.

Винтовки, используемые в соревнованиях по стрельбе из комбинированной винтовки, должны относиться к одному из следующих классов.

  • Класс A — Короткоствольные (21 «) карабинные винтовки с коротким стволом (100 м).
  • Класс B- Средняя дальность (от 200 до 300 м), ручная стрельба по центру ствола или рычага. управляемые или самозарядные многозарядные винтовки
  • Класс C- Длинноствольные винтовки для стрельбы на дальние дистанции (более 500 м), включая старинные военные винтовки.
  • Класс D- винтовки с затворным патроном, такие как однозарядные ружья с центральным выстрелом с черным порохом и винтовки с центральным выстрелом с падающим блоком.
  • Класс E Дульные, однозарядные и не патроны с казенником, включая старинные военные винтовки.
  • Класс F Винтовки класса F (снайперские) состоят из двух подклассов. Класс F1 включает в себя винтажные снайперские винтовки подлинных неизмененных в том виде, в каком они были выпущены, и точные репродукции, как до 1 января 1946 года, тогда как класс F2 включает снайперские винтовки в подлинном неизмененном состоянии в том виде, в котором они были выпущены, и точные копии, как после 2 января 1946 года.Винтовки класса F могут использоваться только на соревнованиях, организованных для их класса или комбинации классов.
  • Класс H- Класс H (модифицированный / точный) винтовки включают в себя винтовки служебного происхождения и калибра с модификациями, выходящими за рамки служебных спецификаций (например, пластиковая ложа, плавающий ствол, ствол со стеклянной ложей, облегченный спусковой механизм и т. Д.), Или модификация для повышения точности сверх спецификации оригинальной винтовки, предназначенной для регулярного использования, и принятая или оцененная для использования оборонной или правоохранительной организацией для специального выпуска для целей, отличных от винтовки класса F.Винтовки класса H могут использоваться только на соревнованиях, организованных для их класса или комбинации классов.
  • Класс J- Винтовки с оптическим прицелом класса J (модифицированные / уточненные) включают винтовки класса H, оснащенные оптическими прицелами. Винтовки класса J могут использоваться только на соревнованиях, организованных для их класса или комбинации классов.
  • Класс T Винтовки класса T (тактические) включают винтовки служебного происхождения, оснащенные телескопическим прицелом с дальномерной сеткой, которые могут использоваться Объединенными службами, предназначенными для прицельной стрельбы на расстоянии от 25 до 600 метров.Такие винтовки могут быть подлинными «снайперскими» винтовками в том виде, в каком они были выпущены, или могут быть винтовкой, созданной для удовлетворения этих требований, начиная с 1 января 1991 года. Винтовки класса T могут использоваться только на соревнованиях, организованных для их класса или комбинации классов.
  • Класс TR Класс TR (учебные винтовки) включает, помимо прочего, учебные винтовки .22 и .310 Martini Cadet, при условии документального подтверждения права винтовки.

Другая информация о винтовке

Комбинированная винтовка для соревнований разрешает использование любой стандартной военной повязки (оригинальной или точной репродукции).Однако он должен быть прикреплен к оригинальной стропе на винтовке, а не прикреплен пуговицами или ремнями к телу или одежде стрелка или к каким-либо внешним механическим опорам, таким как стойка или поручень. Можно использовать одноточечный ремень, если он является стандартным для данной винтовки. Спусковой механизм винтовки должен быть стандартным военным спусковым крючком с усилием отрыва не менее 2,64 фунта (1,2 кг). Приклад винтовки может быть укорочен, но не «спортивен», и ничего (например, пистолетная рукоятка или насадка) не может быть добавлено, если только винтовка не будет реклассифицирована и не будет отнесена к классу F, H или J.Можно использовать противооткатную накладку, если она надвигается и не имеет выступающих крючков. Использование противооткатных накладок является скорее исключением, чем правилом, и их предполагаемое применение должно соответствовать духу соревнований. Тесьма или ремни, на которых держатся подсумки для журналов, нельзя использовать в качестве поддержки, а куртки для стрельбы не должны иметь каких-либо устройств, укрепляющих или ограничивающих тело. Ремень для винтовки ни в коем случае не должен крепиться к одежде. Кожаные куртки специально исключены. Разрешены пальто с подплечниками или налокотниками.Использование перчаток или рукавиц запрещено, за исключением случаев, когда это необходимо по медицинским показаниям. Использование оптических средств, таких как зрительная труба или бинокль, во время соревнований запрещено, за исключением случаев, когда они находятся под руководством назначенного официального лица для проверки цели.

Классы пистолетов

Пистолеты должны соответствовать государственному законодательству об огнестрельном оружии для государства проживания члена, который также должен иметь соответствующую лицензию на огнестрельное оружие и регистрацию. 3-позиционное базовое совпадение используется для получения оценки участника.Книга правил содержит множество различных матчей для пистолета, некоторые из которых оцениваются как оцененные, а остальные считаются открытыми.

Пистолеты

, используемые в соревнованиях по стрельбе из комбинированного оружия, должны относиться к одному из следующих классов.

Класс 1- Пистолеты Класса 1 (Оборонные) включают оригинальные или точные репродукции служебных пистолетов центрального огня с измененной длиной ствола или калибром только в соответствии с национальными законами и законами штата. Участники могут использовать револьверы или самозарядные пистолеты, которые регулярно выдаются в армию, флот или военно-воздушные силы.

Класс 2- Пистолеты класса 2 (правоохранительные органы / полиция) включают оригинальные или точные репродукции служебного огнестрельного оружия с измененной длиной ствола или калибром только в соответствии с национальными законами и законами штата. Участники могут использовать револьверы или самозарядные пистолеты, которые являются или были предметом обсуждения для оборонных или правоохранительных организаций. Пистолет класса 1 не может считаться пистолетом класса 2.

Класс 3- Пистолеты Класса 3 (Accurized / Modified / Target) включают любой служебный пистолет класса 1 или 2 или точную копию, которая была изменена по сравнению с исходной спецификацией, либо после производства, либо на заводе, и может включать регулируемые прицельные приспособления для стрельбы по мишеням, рукоятки, стволы, спусковые механизмы, спусковые крючки или компенсаторы, настраиваемые вручную.

Класс 4- Пистолеты класса 4 (с кольцевым воспламенением) включают любой пистолет с кольцевым воспламенением, который в значительной степени воспроизводит функции пистолета класса 1, 2 или 3.

Класс 5- Пистолеты класса 5 (черный порох) включают любой оригинальный выпуск или точную копию военного пистолета с черным порохом, будь то револьвер или однозарядный пистолет, который в основном использовался в армии, флоте, полиции или парашютистах. военные силы.

В дополнительных соревнованиях, где требуется вытаскивать из кобуры, стрелок должен иметь квалификацию своего штата или территории, а кобура должна быть такого типа, который закрывает спусковой крючок.Использование перчаток или рукавиц запрещено, за исключением случаев, когда это необходимо по медицинским показаниям. Использование оптических средств, таких как телескопические прицелы, прицелы с красной точкой и оптические прицелы, зрительные трубы или бинокли, во время соревнований запрещено, за исключением случаев, когда они находятся под руководством назначенного официального лица для проверки цели. Стрелку запрещается использовать или носить какие-либо оптические приспособления или устройства любого типа, которые предоставляют ему несправедливое преимущество.

Член S.S.A.A? — Форум серых кочевников

Старший член

Статус: не в сети

Сообщений: 127

Дата:

с.Члены S.A.A?


Привет Когда вы говорите «получить разрешение», это означает, что в местном полицейском участке или в отделении лицензирования оружия этого штата.

Qld имеет очень медленный офис лицензирования оружия из-за огромной рабочей нагрузки и очень небольшого числа сотрудников, и я полагаю, что все штаты проходят через те же проблемы

Моя дочь 5 месяцев ждала получения ее скрытой лицензии в Qld

Спасибо Фрэнк Я разместил свой пост перед прочтением вашего

— Отредактировано Antique Pete в субботу 25 февраля 2012 г. 09 : 45: 55 утра

__________________

античный Пит

Старший член

Статус: не в сети

Сообщений: 127

Дата:

Я занимаюсь спортивным стрелком около 30 лет, член Пистолетного клуба Голд-Коста, 20 лет получил степень магистра в Н.Комплекты пистолета RA

Я планирую пройти круг, посетив как можно больше стрелковых клубов и участвуя в соревнованиях

Есть ли другие стрелки, которые делают то же самое, и были ли у вас какие-либо проблемы с транспортировкой спортивного снаряжения из штата в штат (план поставить оружейный сейф в доме на колесах)

__________________

античный Пит

Гуру

Статус: не в сети

Сообщений: 1023

Дата:

Hi Pete

Алан и я являемся членами SSAA на протяжении многих лет, также состою в клубе Seymour Black Powder Club.Каждые два года в июне / июле мы отправляемся в Миллмерран Qld на их рандеву, что очень весело. Сеймур проводит съемки в 1-е и 2-е воскресенье каждого месяца, поэтому, если вы попали сюда и хотели бы приехать, просто дайте нам знать. В клубе есть стрелки из пистолетов, но только черный порох.

__________________

Старший член

Статус: не в сети

Сообщений: 385

Дата:

Я член ssaa, вы должны получить разрешение на каждый штат, в котором вы путешествуете, или рискнуть, но если вас поймают, вы потеряете все.__________________

Гуру

Статус: не в сети

Сообщений: 2411

Дата:

G’day Antique Pete,
Я тоже являюсь членом SSAA NSW.Я, кажется, помню, что было требование позвонить в первый полицейский участок на границе каждого штата и получить разрешение. вам потребовались все ваши лицензии и документация, чтобы доказать ваше право владеть и использовать огнестрельное оружие в вашем штате.

Я не уверен, так ли это до сих пор. вы можете проверить на веб-сайте реестра огнестрельного оружия полиции Нового Южного Уэльса.

франков

__________________

Avagreatday.

Кэти и Фрэнк сейчас дома возле Квиринди, Новый Южный Уэльс

Гуру

Статус: не в сети

Сообщений: 885

Дата:

Ага, тогда намного лучше быть преступником, потому что они не соблюдают ни один из этих законов и ограничений. и без лицензии, эти наказания не применяются к ним, поэтому суд может вместо этого шлепнуть их по запястьям.

Очень хорошо, поэтому мы так хорошо оплачиваем опросы (сарказм).

— Отредактировано johnq, суббота, 25 февраля 2012 г., 17:49:49

__________________

Старший член

Статус: не в сети

Сообщений: 127

Дата:

Привет, Алан и бренд

Я стрелял в БП, но я.38 c / f и .22 shooter Я стреляю в основном из N.R.A, сервиса и I.P.S.C для развлечения и отдыха. У меня есть пара одинарных ковбойских ружей Uberti .38 и 44,40, но они уже выставлены на продажу, прежде чем я отправлюсь в путь

__________________

античный Пит

Гуру

Статус: не в сети

Сообщений: 2454

Дата:

Главный одно перо

Статус: не в сети

Сообщений: 16596

Дата:

У меня был.22 Полуавтоматическое ружье на 15 выстрелов, двуствольное ружье, ружье с вертикальным и поднятым стволом, одноствольное ружье с рычажным механизмом действия и 303. Все они были полезны, и я хорошо провел время с ними всеми. Пока не появился мой первый ребенок, потом избавился от них всех.

Это только что напомнило мне о том, как мы с товарищем застряли на дереве в течение 2 часов, ожидая, пока очень большая и очень расстроенная дикая свинья уйдет от подножия дерева. Почему вы не застрелили его тогда, я вот вы говорите, ну, он охранял 303, который был оставлен (сброшен в спешке) у подножия дерева.Мы оба много смеялись с тех пор, но не тогда, нам обоим было всего по 20, и только мы и наша химчистка точно знали, как мы себя чувствовали.

AP удачи

— отредактировал Дугве, суббота, 25 февраля 2012 18:44:19

__________________

Живи жизнью на своих условиях

DOUG Chief One Feather (С возрастом теряет перья)

TUG……. 2014 Holden LT Colorado Twin Cab Ute с навесом

DEN ……. 2014 «Chief» Arrow CV (с некоторыми изменениями)

Старший член

Статус: не в сети

Сообщений: 127

Дата:

Спасибо Вик

очень хорошо Информация

__________________

античный Пит

Старший член

Статус: не в сети

Сообщений: 385

Дата:

Если вы напишете мне в личку, я дам вам контакт, который идет в компанию по внутреннему государству, он знает, что требуется, чтобы стрелять в штат.

__________________

Гуру

Статус: не в сети

Сообщений: 952

Дата:

Hi AntiquePete,

Я — S.S.A.A. член, а также активный стрелок из пистолета.

Мы будем двигаться через пару месяцев и собираемся начать задавать те же вопросы, поскольку мы хотели бы стрелять по нескольким пистолетным клубам на пути.

Убедитесь, что если вы приедете в Балларат, то в субботу днем ​​зайдите в пистолетный клуб и сделайте выстрел. Вы можете даже выиграть пару ночей в палатке дешево. Если я могу помочь с контактами здесь в любое время, пожалуйста, не стесняйтесь писать мне в PM.

Всего наилучшего Лэнди

— Отредактировал Лэнди в субботу, 25 февраля 2012 г., 23:35:18

__________________

Гуру

Статус: не в сети

Сообщений: 834

Дата:

Законы о ввозе огнестрельного оружия значительно различаются от штата к штату, и просто заехать в первый полицейский участок за границей — это еще не значит, что в большинстве штатов это невозможно.

Направляйте запросы и отправляйте документы в каждый штат задолго до отъезда в поездку.

По крайней мере, в одном штате вам необходимо знать лицензированного стрелка или быть в контакте с утвержденным клубом, чтобы вы могли указать дату прибытия и дату отъезда в документах, а также указать, где вы будете стрелять. (Или если вы проходите мимо) и т. Д.

Я отказался от съемок ISSF более 15 лет назад.
Мастер-класс по стандартному пистолету) «А» во всех остальных дисциплинах.

Теперь снимайте события PA Service, Wa и NRA.

Мастер в соответствии с Wa1500 и 1920. «B» в обслуживании, обслуживание 25 и неограниченное обслуживание. Был выше, но с годами вернемся назад.

Член Pistol Club Peninula, Mt Martha Vic.

Cheers, OJ

PS> 50 ярдов намного длиннее, чем раньше. РЖУ НЕ МОГУ.

__________________

Инженер на пенсии, владелец ExPark и консультант по прицепам.
Holden 2.8 Colorado — Roma Elegance 17’6 «Pop Top.
Расположение: Mornington Peninsula Vic.

Гуру

Статус: не в сети

Сообщений: 2951

Дата:

Дугве написал:


У меня был файл.22 Полуавтоматическое ружье на 15 выстрелов, двуствольное ружье, ружье с вертикальным и поднятым стволом, одноствольное ружье с рычажным механизмом действия и 303. Все они были полезны, и я хорошо провел время с ними всеми. Пока не появился мой первый ребенок, потом избавился от них всех.

Это только что напомнило мне о том, как мы с товарищем застряли на дереве в течение 2 часов, ожидая, пока очень большая и очень расстроенная дикая свинья уйдет от подножия дерева. Почему вы не застрелили его тогда, я вот вы говорите, ну, он охранял 303, который был оставлен (сброшен в спешке) у подножия дерева.Мы оба много смеялись с тех пор, но не тогда, нам обоим было всего по 20, и только мы и наша химчистка точно знали, как мы себя чувствовали.

Удачи, AP

— Отредактировал Дугве в субботу, 25 февраля 2012 18:44:19


Ага, и теперь мы все получаем вашего приятеля по дрифту.

__________________

Если я не приеду сегодня, я приеду завтра или послезавтра.

Джон и Айрона………. Рокингем, Западная Австралия

Старший член

Статус: не в сети

Сообщений: 127

Дата:

__________________

античный Пит

Старший член

Статус: не в сети

Сообщений: 127

Дата:

Привет, Лэнди
Спасибо за приглашение, то же самое касается пистолетного клуба Голд-Кост, у нас есть площадки для краткосрочного пребывания, и в нашем клубе приветствуются стрелки из разных штатов, мы снимаем ISSF, NRA IPSC, WAM, AIR и винтовки пистолетного калибра 7 дней в неделя с 9 утра до 5 вечера, бесплатные мишени и нашивки поставляются
Пенсионеры стреляют по средам из любого пистолета или калибра 12 различных матчей в течение 12-недельного цикла. Мы приветствуем всех [мы известны как дружеский клуб], теперь около 1000 членов
Полиция штата , федералы и таможня используют наш клуб для обновления своего обучения
Мы — SSAA, IPSC, Qpsa, N.Аффилированные лица R.A и PA

__________________

античный Пит

Гуру

Статус: не в сети

Сообщений: 952

Дата:

Ух ты, Пит, похоже, у тебя там какой-то клуб, и мы обязательно заглянем, когда пройдем этот путь.Боюсь, что пистолетная дубинка Балларата далеко не так сложна, но мы дружелюбны.

В основном мы снимаем ISSF ежемесячно, почти все по субботам. У нас есть семь диапазонов 2 x 25 метров, 2 x 50 метров, 1 диапазон тарелок, 1 пневматический пистолет и один специальный диапазон со стальными и реактивными целями для ковбойских действий, IPSC и т.п. Еще снимаем несколько спичек из винтовок; .22 скамья, служебная винтовка (загруженные 303s и т. Д.) И 50-метровая винтовка с дульным заряжанием.

Надеюсь, наши пути где-нибудь пересекутся.

Лэнди

__________________

Старший член

Статус: не в сети

Сообщений: 127

Дата:

Уверен, мы догоним Лэнди
Пусть у тебя будет десяток снимков

__________________

античный Пит

Гуру

Статус: не в сети

Сообщений: 2951

Дата:

Лэнди написал:


Вау, Пит, похоже, у тебя там какой-то клуб, и мы обязательно заглянем, когда пройдем этот путь.Боюсь, что пистолетная дубинка Балларата далеко не так сложна, но мы дружелюбны.

В основном мы снимаем ISSF ежемесячно, почти все по субботам. У нас есть семь диапазонов 2 x 25 метров, 2 x 50 метров, 1 диапазон тарелок, 1 пневматический пистолет и один специальный диапазон со стальными и реактивными целями для ковбойских действий, IPSC и т.п. Еще снимаем несколько спичек из винтовок; .22 скамья, служебная винтовка (загруженные 303s и т. Д.) И 50-метровая винтовка с дульным заряжанием.

Надеюсь, наши пути где-нибудь пересекутся.

Landy


и 50-метровая винтовка с дульным заряжанием.

Вот черт возьми, чертовски большой каноник.

__________________

Если я не приеду сегодня, я приеду завтра или послезавтра.

John & Irona ………. Рокингем, Западная Австралия

Гуру

Статус: не в сети

Сообщений: 952

Дата:

JHR разместила винтовку

,

и 50-метровую дульнозарядную винтовку.

Вот черт возьми, чертовски большой каноник.

В Виктории Джон мы ничего не делаем наполовину.

Лэнди

__________________

Гуру

Статус: не в сети

Сообщений: 952

Дата:

Antique Pete писал:


Я уверен, что мы догоним Лэнди
Пусть у вас будут десятки выстрелов


Спасибо, парднер, держи порошок сухим.

__________________

Гуру

Статус: не в сети

Сообщений: 2951

Дата:

landy писал:


JHR разместил

,

и 50-метровую винтовку с дульным заряжанием.

Вот черт возьми, чертовски большой каноник.

В Виктории Джон мы ничего не делаем наполовину.

Лэнди


Осторожно, не навредите себе там.

__________________

Если я не приеду сегодня, я приеду завтра или послезавтра.

John & Irona ………. Рокингем, Западная Австралия

Гуру

Статус: не в сети

Сообщений: 952

Дата:

JRH писал:


landy писал:


JHR разместил

и 50-метровую винтовку с дульным заряжанием.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *